24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 873  |  回复: 22
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)

[交流] 细菌表达,SDS-PAGE的一个问题。

我用的是pET28a做载体,构建的重组质粒目的片段约1.3kb;直接取菌液做SDS-PAGE,如果得到完整翻译的话,蛋白电泳结果显示大小应该在45kd左右。

实验用未诱导的同一株菌做阴性对照,将目的菌株过夜培养,1%接种量转接2h后加IPTG诱导6h,结果在45kd附近出现了两条带,而阴性对照的没有对应的条带。

这是怎么回事?表达一个目的片段,为什么会出现两条带?

求助!!!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 银杏下 at 2009-8-6 19:03:
很可能是c端含有连续的稀有密码子,使蛋白不能完全被翻译。我个人认为与GC含量无关。可以尝试用Rosetta表达。

哦!是这样。那我试试吧。谢谢了。
23楼2009-09-26 09:20:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

bio830805

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
考虑是否存在大小不一的两个亚基的情况
不会跳舞的外语达人不是好生物学家
2楼2009-07-28 20:47:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-8 18:56
大小不一的两个亚基?您是说同分异构体吗?
那会对蛋白活力有影响么?
3楼2009-07-28 21:38:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w19840308


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
跑了几次电泳?结果都是这样?
确定是单克隆?
4楼2009-07-28 21:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见