应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细菌表达，SDS-PAGE的一个问题。
231/3返回列表123下一页
查看: 935  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

melodyxin

铜虫 (小有名气)

[交流] 细菌表达，SDS-PAGE的一个问题。

我用的是pET28a做载体，构建的重组质粒目的片段约1.3kb；直接取菌液做SDS-PAGE，如果得到完整翻译的话，蛋白电泳结果显示大小应该在45kd左右。

实验用未诱导的同一株菌做阴性对照，将目的菌株过夜培养，1%接种量转接2h后加IPTG诱导6h，结果在45kd附近出现了两条带，而阴性对照的没有对应的条带。

这是怎么回事？表达一个目的片段，为什么会出现两条带？

求助！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-07-28 20:18:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bio830805

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
考虑是否存在大小不一的两个亚基的情况
赞一下(1人) 回复此楼
不会跳舞的外语达人不是好生物学家
2楼2009-07-28 20:47:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-8 18:56
大小不一的两个亚基?您是说同分异构体吗？
那会对蛋白活力有影响么？
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2009-07-28 21:38:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w19840308

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
跑了几次电泳？结果都是这样？
确定是单克隆？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-07-28 21:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)
随机挑了四个单克隆都是一样的结果。跑了一次电泳。
赞一下 回复此楼
5楼2009-07-28 21:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)
有人可以帮忙分析看看吗？我的目的片段GC含量偏高，大概在63%左右，是不是对细菌表达有影响？
赞一下 回复此楼
6楼2009-07-29 00:38:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝皮鼠7983

至尊木虫 (文坛精英)

飞过蓝天
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
GC含量高说明能量大,需要另外设计思路
赞一下(1人) 回复此楼
海到尽头天做岸，山登绝顶我为峰。
7楼2009-07-29 00:59:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-2 13:04
表达蛋白出现部分降解，就成了大小不等的两个条带了。建议表达时分时间段取样，注意保存条件，降低表达时的温度。然后跑电泳看不同时间段表达产物的大小，条带。
赞一下(10人) 回复此楼
金币是赌出来的
8楼2009-07-29 08:42:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-2 13:04
是不是表达时间太久的缘故？那是不是说，必须在蛋白没有降解以前测定酶活了？
一般隔多久取样，温度我是定在30度诱导的，还要再降低吗？
赞一下(10人) 回复此楼
9楼2009-08-02 12:02:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 蓝皮鼠7983 at 2009-7-29 00:59:
GC含量高说明能量大,需要另外设计思路

什么意思？不是很明白啊。您是说要换载体换宿主吗？
赞一下 回复此楼
10楼2009-08-02 12:03:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 melodyxin 的主题更新
231/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +7 生物工程调剂 2026-03-17 12/600 2026-03-23 18:18 by YMU施老师
[考研] 306求调剂 +9 chuanzhu川烛 2026-03-18 9/450 2026-03-23 13:17 by luoyongfeng
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +8 tcxiaoxx 2026-03-20 9/450 2026-03-23 12:16 by tcxiaoxx
[考研] 生物学071000 329分求调剂 +5 我爱生物生物爱� 2026-03-17 5/250 2026-03-22 16:42 by tcx007
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 289求调剂 +7 怀瑾握瑜l 2026-03-20 7/350 2026-03-22 15:57 by ColorlessPI
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 广西大学材料导师推荐 +3 夏夏夏小正 2026-03-17 5/250 2026-03-21 22:20 by 金昊ML
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +11 吃吃吃才有意义 2026-03-19 11/550 2026-03-21 18:23 by 学员8dgXkO
[考研] 302求调剂 +12 呼呼呼。。。。 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:29 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +11 Ymlll 2026-03-18 15/750 2026-03-20 19:40 by 丁丁*
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭