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melodyxin

铜虫 (小有名气)

[交流] 细菌表达,SDS-PAGE的一个问题。

我用的是pET28a做载体,构建的重组质粒目的片段约1.3kb;直接取菌液做SDS-PAGE,如果得到完整翻译的话,蛋白电泳结果显示大小应该在45kd左右。

实验用未诱导的同一株菌做阴性对照,将目的菌株过夜培养,1%接种量转接2h后加IPTG诱导6h,结果在45kd附近出现了两条带,而阴性对照的没有对应的条带。

这是怎么回事?表达一个目的片段,为什么会出现两条带?

求助!!!!
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melodyxin

铜虫 (小有名气)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-8 18:56
大小不一的两个亚基?您是说同分异构体吗?
那会对蛋白活力有影响么?
3楼2009-07-28 21:38:58
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bio830805

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
考虑是否存在大小不一的两个亚基的情况
不会跳舞的外语达人不是好生物学家
2楼2009-07-28 20:47:41
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w19840308


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
跑了几次电泳?结果都是这样?
确定是单克隆?
4楼2009-07-28 21:49:13
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melodyxin

铜虫 (小有名气)

随机挑了四个单克隆都是一样的结果。跑了一次电泳。
5楼2009-07-28 21:55:45
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