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381466632

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by smallcat227 at 2009-7-28 15:33:
楼主用普通的Taq扩增效果如何?

同意楼上几位说的,延长延伸时间,退火时间差不多够了

不过最根本的问题还是引物设计,有条件的话最好还是重新设计

普通酶从55度到72度都可以p出我得目的条带,extaq酶也能够p出来,就是目的弱,换了pfu之后就p不出来了,是否是我的酶不好?
21楼2009-07-29 13:17:19
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381466632

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by ytetyio09 at 2009-7-28 15:20:
obviously, your extension time is too short, use 4-5min, have a try again. Because the speed of PFU amplification is about 500bp/min.

your annealing time is more than enough.

[ Last edited b ...

谢谢,
22楼2009-07-30 13:45:41
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fz-xyz

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 381466632 at 2009-7-28 14:51:


首先谢谢你,可不可以把oligo看错配说得详细点,学习一下。还有我的扩增条带1900左右。退火时间需要延长吗?

oligo进去后输入模版序列,
edit中输入上下引物序列
analyze中的false priming可以查看配对效率。
效率越高,配对越好。

我用的是oligo 6
追求科学
23楼2009-07-31 09:35:15
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fz-xyz

银虫 (小有名气)

tiangen的PFU说明书上说延伸速度是0.5-1KB每分钟,调整下退火时间~
追求科学
24楼2009-07-31 09:39:56
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381466632

木虫 (正式写手)

谢谢各位了
25楼2009-08-01 12:25:00
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