| 查看: 363 | 回复: 6 | ||
| 当前主题已经存档。 | ||
695木虫 (职业作家)
|
[交流]
PCR验证有杂带，怎么办？[问题已解]
|
|
|
大家好！我目前在做RACE，用的smart试剂盒，成功得到我的一端目的片段是 2.0kb，连接转化到pGME T载体上，空载体与质粒的间距对比，质粒酶切结果都很好，但是M13F-M13R PCR做验证的时候，除了有较好的目的带外，硬是能跑出一条1Kb的带。以前我曾用SP6-T7 pcr做验证，由于试剂盒里的UPM引物上有个T7的结合位点，验证的时候多出的带在700bp的位置。现在我测序用什么引物呢，求大家帮我开导，多谢了！不甚感激。 我的M13F-M13R PCR REACTION为： 94 3min 35cycles 94 1min 50 1min 72 1min 72 10min [ Last edited by 695 on 2009-7-28 at 20:57 ] |
回复此楼
amisking
荣誉版主 (文坛精英)
- 应助: 45 (小学生)
- 贵宾: 28.304
- 金币: 51353.9
- 散金: 3080
- 红花: 78
- 沙发: 17
- 帖子: 13022
- 在线: 839小时
- 虫号: 514230
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 微生物资源与分类学
- 管辖: 分子生物
2楼2009-07-27 18:07:53
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
3楼2009-07-27 18:11:25
695
木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 4528.5
- 散金: 126
- 红花: 5
- 帖子: 3149
- 在线: 394.1小时
- 虫号: 347369
- 注册: 2007-04-16
- 专业: 植物生理与生化
4楼2009-07-27 18:14:15
1949stone
荣誉版主 (知名作家)
海纳百川
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 2.38
- 金币: 2622.9
- 散金: 3394
- 红花: 177
- 沙发: 8
- 帖子: 9829
- 在线: 2692.8小时
- 虫号: 765987
- 注册: 2009-05-08
- 性别: GG
- 专业: 药物分析
- 管辖: 分子生物
5楼2009-07-27 20:20:18
6楼2009-07-27 21:03:38
695
木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 4528.5
- 散金: 126
- 红花: 5
- 帖子: 3149
- 在线: 394.1小时
- 虫号: 347369
- 注册: 2007-04-16
- 专业: 植物生理与生化
7楼2009-07-27 21:13:30
