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695

木虫 (职业作家)

[交流] PCR验证有杂带,怎么办?[问题已解]

大家好!我目前在做RACE,用的smart试剂盒,成功得到我的一端目的片段是 2.0kb,连接转化到pGME T载体上,空载体与质粒的间距对比,质粒酶切结果都很好,但是M13F-M13R PCR做验证的时候,除了有较好的目的带外,硬是能跑出一条1Kb的带。以前我曾用SP6-T7 pcr做验证,由于试剂盒里的UPM引物上有个T7的结合位点,验证的时候多出的带在700bp的位置。现在我测序用什么引物呢,求大家帮我开导,多谢了!不甚感激。

我的M13F-M13R PCR REACTION为:

94   3min

35cycles

94  1min
50  1min
72  1min

72  10min

[ Last edited by 695 on 2009-7-28 at 20:57 ]
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=1453130

貌似我在这帖回答过你的问题啊~
有没有去再试试
3楼2009-07-27 18:11:25
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695

木虫 (职业作家)

哈哈,谢谢楼上仁兄的指点,这个我正在参考中,心急所以又来应试了
4楼2009-07-27 18:14:15
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不仅有杂带 RNA你也没除啊 特异性底 镁离子变变 我以前也有过这个情况
海纳百川止于至善
5楼2009-07-27 20:20:18
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蓝皮鼠7983

至尊木虫 (文坛精英)

飞过蓝天


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
好好的重新做一遍吧,做实验就还要在失败之后找到原因,才能有进步
海到尽头天做岸,山登绝顶我为峰。
6楼2009-07-27 21:03:38
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