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695

木虫 (职业作家)

[交流] 有关克隆环节求救

大家好!我目前在做RACE,用的smart试剂盒,成功得到我的一端目的片段是2.0kb,连接转化到pGME T载体上,空载体与质粒的间距对比,质粒酶切结果都很好,但是M13F-M13R PCR做验证的时候,除了有较好的目的带外,硬是能跑出一条1Kb的带。以前我曾用SP6-T7 pcr做验证,由于试剂盒里的UPM引物上有个T7的结合位点,验证的时候多出的带在700bp的位置。现在我测序用什么引物呢,求大家帮我开导,多谢了!不甚感激。

我的M13F-M13R PCR REACTION为:

94   3min

35cycles

94  1min
50  1min
72  1min

72  10min

[ Last edited by 695 on 2009-7-25 at 17:03 ]
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

…………既然你知道目的片段是2kb了
那么为何PCR验证的时候延伸时间那么短……
一般按照1kb/min设置
2楼2009-07-25 18:17:49
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