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695

木虫 (职业作家)

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[交流] 有关克隆环节求救

大家好！我目前在做RACE，用的smart试剂盒，成功得到我的一端目的片段是2.0kb，连接转化到pGME T载体上，空载体与质粒的间距对比，质粒酶切结果都很好，但是M13F-M13R PCR做验证的时候，除了有较好的目的带外，硬是能跑出一条1Kb的带。以前我曾用SP6-T7 pcr做验证，由于试剂盒里的UPM引物上有个T7的结合位点，验证的时候多出的带在700bp的位置。现在我测序用什么引物呢，求大家帮我开导，多谢了！不甚感激。

我的M13F-M13R PCR REACTION为：

94 3min

35cycles

94  1min
50  1min
72  1min

72  10min

[ Last edited by 695 on 2009-7-25 at 17:03 ]

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