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α-葡萄糖苷酶抑制活性实验 已有1人参与
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一、目前在体系优化，遇到的问题是：未出现平台期，每次实验所得数据有一定差距，曲线趋势不统一，无法确定最适酶浓度和底物蔗糖浓度，希望有前辈能提些建议。 二、实验用的方法是： ①0.1M的PBS 70ul和20ul酶混合预热10min,（空白组为不加酶，其他条件皆一致） ②加入20ul蔗糖反应30min， ③加入100ul的0.2M的碳酸钠终止，（以上反应在1.5ml的离心管内完成，与在酶标板内反应所得数据对比而言，前者反应更充分） ④取50ul反应液，往其中加入150ul葡萄糖工作液，再反应15min后酶标仪测OD。 三、但在体系优化这个环节就出现了问题，我参考文献，选取1.0U/ml的酶，加入不同浓度蔗糖（10、20、40、60、80、100、120、140、160mmol/l）但没有平台期，蔗糖60与80这边较平，但160的OD又很高。之后又重复了好几次，但是曲线规律不统一，仍然无法确定最适蔗糖浓度，但文献里又做出来了，不清楚我到底漏了什么细节，希望做过类似实验的前辈能指导一下。（ps先前我增加过终止液的浓度后，发现有平台期，但是测出来的数据太小了，意义不大。) @lifeliuyan 发自小木虫Android客户端 |
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