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茯苓鸭

新虫 (初入文坛)

[求助] α-葡萄糖苷酶抑制活性实验 已有1人参与

一、目前在体系优化,遇到的问题是:未出现平台期,每次实验所得数据有一定差距,曲线趋势不统一,无法确定最适酶浓度和底物蔗糖浓度,希望有前辈能提些建议。
二、实验用的方法是:
①0.1M的PBS 70ul和20ul酶混合预热10min,(空白组为不加酶,其他条件皆一致)
②加入20ul蔗糖反应30min,
③加入100ul的0.2M的碳酸钠终止,(以上反应在1.5ml的离心管内完成,与在酶标板内反应所得数据对比而言,前者反应更充分)
④取50ul反应液,往其中加入150ul葡萄糖工作液,再反应15min后酶标仪测OD。
三、但在体系优化这个环节就出现了问题,我参考文献,选取1.0U/ml的酶,加入不同浓度蔗糖(10、20、40、60、80、100、120、140、160mmol/l)但没有平台期,蔗糖60与80这边较平,但160的OD又很高。之后又重复了好几次,但是曲线规律不统一,仍然无法确定最适蔗糖浓度,但文献里又做出来了,不清楚我到底漏了什么细节,希望做过类似实验的前辈能指导一下。(ps先前我增加过终止液的浓度后,发现有平台期,但是测出来的数据太小了,意义不大。)

@lifeliuyan 发自小木虫Android客户端
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zhangchaohua

新虫 (正式写手)


3楼2020-12-25 01:32:42
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hust+whu

木虫 (知名作家)

大家好!
2楼2020-12-25 00:16:34
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zbgood2009

至尊木虫 (职业作家)

酶标仪法好像没有HPLC法准确,我也打算做呢,考虑用HPLC法

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Doyourbest!
4楼2020-12-25 07:50:35
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茯苓鸭

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zbgood2009 at 2020-12-25 07:50:35
酶标仪法好像没有HPLC法准确,我也打算做呢,考虑用HPLC法

害,大型仪器可能没法使用

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5楼2020-12-25 08:24:37
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