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小小书虫飞

新虫 (小有名气)

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[交流] DNA与RNA提取注意事项已有1人参与

1. RNA制备的关键是要抑制细胞中的RNA分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA分解酶的污染。EP管及Tip头都要用0.1%处理(0.1% DEPC浸泡过夜后高压蒸气灭菌)。用于RNA实验的试剂须使用DEPC水处理灭菌后的玻璃容器盛装使用的无菌水须用0.1%的DEPC处理后再进行高温高压灭菌。最好在超净台内操作。

2、提取时操作带一次性手套、口罩等小心、细致、晃动及每次移液要轻在操作过程中避免讲话等。这样做的唯一目的就是两个：一是小心RNAse的污染降解RNA二是动作过度暴力破坏RNA的完整性。

3、电泳液需新鲜配制。电泳槽和模具需预先进行处理。

4. 一般RNA电泳应该是做甲醛变性电泳，但是一般的琼脂糖电泳也可以需要上样量稍微大些并且跑电泳的时间越短越好(这样也是为了减少外界RNAse对RNA的降解)跑完电泳立刻观察。

5、需要用EB染色，Genefinder染色效果不好，其对双链DNA的效果好。

6、器材的处理尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前按下列方法进行处理。

（1）用0.1% DEPC焦碳酸二乙酯水溶液在37℃下处理12小时。

（2）然后在120℃下高压灭菌30分钟以除去残留的DEPC。RNA实验用的器具建议专门使用，不要用于其它实验。

（转自先达基因（www.gendx.cn））

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