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hanzz19

新虫 (初入文坛)

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帖子: 21
在线: 30.5小时
虫号: 21949380
注册: 2020-04-22

[求助] 关于lncRNA 胞浆胞核分离，用于lncRNA定位分析

我想通过胞浆胞核分离的方法用于lncRNA定位分析，在分离胞浆胞核这一步出现了问题。
   主要实验步骤：1.收集细胞用PBS洗涤后加入800ul预冷的低渗裂解液(10mM hepes  ,1.5mM Mgcl2 , 10mMKcl),冰上2分钟
                           2.加入10%NP-40 35ul ,使得NP-40最终浓度为0.4%，
                           3. 反复颠倒离心，3000rpm, 7min
                           4. 取500ul上清做胞浆用于后续提RNA
                           5.沉淀用低渗裂解液(不含NP-40)洗涤3次，
                           6. 3000RPM,2MIN.去除上清，收集沉淀提胞核RNA。
   遇到问题：1.胞核的ACTIN比胞浆亮很多，但胞浆U2和胞核U2都很亮没有差异
                     胞核ACTIN比胞浆亮，考虑可能是裂解不好，细胞都没裂解开，沉淀下去到胞核里了；但如果是这种考虑，胞浆和胞核U2不应该一样亮啊，我分析不出来原因了，求教大佬啊
                     2. 胞核的引物我选用了U2和U6
                        U2能P出来，U6却不能P出来，这是为什么啊？U6和U2有什么区别？

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