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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 土壤DNA提取后的PCR问题
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yxx41

金虫 (小有名气)

[交流] 土壤DNA提取后的PCR问题

我在做浸矿微生物的相关内容，按照周集中的方法提取土壤DNA后，未经过纯化，进行PCR，但是在PCR时加入了DMSO，一直在进行PCR，但是除过使用东盛的Mix成功获得扩增条带外，使用Takara的单加的套装怎么也出不来。
我想用Mix获得扩增条带说明还是提取出了少量的DNA的，但是可能量太少了，所以使用单加的套装后怎么都出不来啊……
在此期望各位的解惑，同时我是否应该纯化后再进行PCR，但是纯化又会造成一定的DNA损失……
先行谢过各位了！
——————————————————————————————————————————
谢谢各位的解答，我准备重新进行土壤DNA的提取，然后再进行PCR。希望能有好结果！
再次严重感谢各位啊！

[ Last edited by yxx41 on 2009-7-29 at 09:42 ]
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内事不决问百度，外事不决问Google，横批：wikipedia
1楼 2009-07-23 11:52:25
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caoliang38

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-26 10:21
为何不继续使用东盛的MIX 而使用单加的套装
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2楼2009-07-23 14:00:09
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yxx41

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yxx41 at 2009-7-23 11:52:
我在做浸矿微生物的相关内容，按照周集中的方法提取土壤DNA后，未经过纯化，进行PCR，但是在PCR时加入了DMSO，一直在进行PCR，但是除过使用东盛的Mix成功获得扩增条带外，使用Takara的单加的套装怎么也出不来。
...

后期要进行DGGE，使用Mix的话非特异性扩增会较之一般单加的PCR更甚，是会造成误差的啊，而且DGGE条带也会有较深的背景。故弃之不用。
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内事不决问百度，外事不决问Google，横批：wikipedia
3楼2009-07-23 15:30:55
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-26 10:21
Mg2+浓度调过了吗。
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4楼2009-07-23 15:57:34
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weilin2378

木虫 (小有名气)
★
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建议楼主将DNA跑电泳纯化一下，去除腐殖酸的污染
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5楼2009-07-23 18:50:11
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yxx41

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuanbo934 at 2009-7-23 15:57:
Mg2+浓度调过了吗。

没有啊……我用的Takara的套装Mg2+是加到PCR buffer里面的那种。
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内事不决问百度，外事不决问Google，横批：wikipedia
6楼2009-07-24 09:56:31
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yxx41

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by weilin2378 at 2009-7-23 18:50:
建议楼主将DNA跑电泳纯化一下，去除腐殖酸的污染

到时候还能回收到DNA吗？
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内事不决问百度，外事不决问Google，横批：wikipedia
7楼2009-07-24 09:59:24
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aga0110125

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
东盛新推出了HS 系列，改进的配方，就是针对非特异性扩增的
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8楼2009-07-24 11:41:36
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by yxx41 at 2009-7-24 09:59:

到时候还能回收到DNA吗？

用回收试剂盒啊
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9楼2009-07-24 11:43:30
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macyang21

木虫 (小有名气)
★
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我也是做土壤的，我觉得做土壤PCR做不出结果，还是DNA的原因！就算做出来了，重复性也是很差！我觉得最笨的办法就是不断的稀释DNA，浓度梯度PCR！
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希望大家可以互相交流
10楼2009-07-24 16:15:49
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