| ²é¿´: 1328 | »Ø¸´: 5 | ||||
| µ±Ç°Ö÷ÌâÒѾ´æµµ¡£ | ||||
| µ±Ç°Ö»ÏÔʾÂú×ãÖ¸¶¨Ìõ¼þµÄ»ØÌû£¬µã»÷ÕâÀï²é¿´±¾»°ÌâµÄËùÓлØÌû | ||||
zhaolixia0814½ð³æ (СÓÐÃûÆø)
|
[½»Á÷]
[×ªÔØ×Ô¶¡ÏãÔ°´ºÓê?÷?÷] ¼×»ù»¯¼ì²â·½·¨£¨ÑÇÁòËáÇâÑÎÐÞÊκó²âÐò·¨£©
|
|||
|
??protocol ???????????????????????? ?????????BSP??????????????????????????¦Í??DNA?????????????????????????¦Ë?§à??????????????????????????????§ÕÑe ?????????????????????????? ????????????§à????????????????????????????????????????????????????????????? ??????? ??????DNA??????? ??????????????????????????????????DNA???????§µ????????????????????????????????????DNA????????????????§Ó????????????????????DNA???????????? ??????????DNA????????????????RNA????????????????????????????????????????K??RNA??????????? ???????????? 1???????K???????????????????20mg/ml?? 2??RNA??????????????DNA???RNA??????????????RNA??????????????????10mg/ml????????????????????RNA????DNA?????????????????-20????µµ ??????DNA??????????§Ø??? 1??????????????OD????? 2??1%-1.5%???????????????? ???????????????????????????????????????????DNA????????????Marker??????????????????????????????????¦±? ??????? ?????????????¦Ë?????DNA ?» ??????????????????DDW?????????????????? 1?????2ugDNA??1.5mlEP???????DDW?????50ul?? 2????5.5ul?????????3M NaOH?? 3?? 42????30min?? ?????????? 4??10mM??????????????????30ul??????????????§µ??????????????? 5?? 3.6M???????????Sigma??S9000?????????????1.88g?????????????DDW????????3M NaOH?¦Æ??????PH 5.0??????????5ml?????????????????????????????????NaOH????????????????????PH???????5.0????520ul??????????????§³? 6??EP???????????????????????????????? 7????200 ul ???????????????????????????? 8??50??????16h?? ???????4pm??????????????????5pm??????????16h??????????8am???????????????? ????????? 1????????DNA?????????????????????????????????????????§Ý??§Ø????????????????????4ug?? 2????????????????????????????????????????????????????? 3???????????????????????????¨¹?PH????5.0??????PH?????????????????????? 4????????16§³???????????8§³????????????¦Ë??§Ó?????? ???????? ???¦Ê?DNA???????? EP???????????????????????????? 1. ???????¨¿????????????????????????????§³???????????????????????????1.5mlEP???§³? 2?????????Promega Wizard Cleanup DNA????????????Promega??A7280?? 1??70???????DDW??????80%??????? 2????1ml Promega??s Wizard DNA Clean-up resin??????????????DNA???????????? 3?????????????§ß?????????????????????????????????????????????????§µ???????3ml-5ml???????????????????????????????§³????????????????????????????????????????2ml?????EP?????§³??????????????????????????????�Š??????????§³?????§Ñ????????????? 4???????????§³???????¦Ã??????????????§³?????????????????2ml 80?????????????????????????????????????????????????Ò 5???????????§³????????§³???????1.5ml??EP?????????12000rpm??2min???????????????????????????????????¦Ê?DNA???????????????? 6????§³??????????????1.5mlEP????????????50ul?????DDW?????¡¤???5min?? 7??????12000rpm??20s??????????Ñk???EP??????�‡????????¦Ê?DNA???????????50ul?? 3????5.5ul ?????????3M NaOH?????¡¤???15min?? 4????33ul 10M????Äà????§Ü?NaOH??????PH??7.0????? 5????4ul 10mg/ml????????????????????????????????????????????????????????????????¦Ë???????????????????????????????????????????§»??????????????????????????????§Û?????????????????????????????????????????????????¨À? 6????270ul ??????????????-20???????????????????????????2§³?????????????§»???????¨¢????????????????????????íà?????????????????íà???????¨´??????????????§»???????§»???????î•????????????????????????????????§»???????6§³??????????ï…??????????6§³??????????????????????????? 7??4???12000rpm?????30min??????????????????????????????? 8????500ul 70%?????????????????????????????????????¨À???????§ÒEP??????????????????4??12000rpm??5min???????????ÈÉ????????????????????î•????????Ñk??2?¦±? 9?????????ÈÉ?????????????????????????EP?????????§³???????????????????????5min?????????????????????????????????20ul-30ulDDW?????????????????????????¦Ê?DNA??????????????????¦Ê?DNA????????????????????î• 10??-20?›C??DNA????? ??????? 1???????????????????????????????????????????§³?????????????????¨¢? 2??????Àî??????????????????????¨²????-20????—¨????????????????????????????Á¢??????????????4?????????????§Ü???????????? 3?????????70%????????????????????????????????????????? ???????????????DNA????????????????????????????????PH?????????????????DNA????????????????PH??????????????????????????DNA?????????????????????????DNA??????Œã????????????????????¦Ê?DNA?? ??????? ???¦Ê?DNA????PCR ????????????þŸ?????????????????????????????? 1????????????§à?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????¦Ï????????§»?????????SCI????????????????????????????????????????????????????????????????????ùz???§Ü???????Genbank?§Ö????§ß??§Ò?????????????????????????????????google???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? 2??Taq?????????????????????Taq??Platinum????????§à????????????????????????????????????????????????????????Takara??LA Taq????????????10x??mg++??LA???????????????????????Takara ?????Taq???????????????????????????????????????¨²???????? 3??PCR??????????????????95???3min????????§à??????????????????????????????????????§³??¦¶?????????????????????????????????????????????????????? 4????PCR??EP??????????????????????????????????????�£??????????????????????????????????Ú…??????????§³? 5??PCR???????????????????????????????????????????????????????????????????????EP???????????????????????????§á?????????????????????? ?????????§»????????????§»???????î•?????????????????????????????????????§Õ?§»?????????????????????????????????§¼???????§Õ????????????????????? ???¿ù?? PCR????????????? ????????????????????????PCR???????????§µ?????????¨¢???????????????TIANGEN???????¨´?????????????????????????????¨À? ???????? 1??PCR??????????????????????????????????????????1%-2%???¨À? 2??????DNA???????300nm?????????????¦Ë????????????????¦Ë?????????????§³???????????? 3?????????????????????????DNA??????? 4????????DNA?» ????????????-20???????????????????? ???????? PCR??????T??????????????????????1??????T???‰Í???????????Promega??????§µ? 15ul??? T-easy 1ul Ligase 1ul 2xbuffer 7.5ul DNA 5.5ul 4???????? 2????????????? 1??-70????????????????????????????????? 2?????????15ul ??????????????30????? 3??42??? 90????? 4??????2????? 5??800ul LB???????? 6??280rpm??37??????45????????????????????????????? 7??8000rpm??1?????????????????ÈÉ??100-150ul?? 8????‰Ø37?????????????????§Ñ?????¨´??????LB???????? ?????X-gar 35ul IPTG 25ul ?????????? ????????????????????????????????????????????????¦¶??????????????????? 3??????????????¡ã??? ?¡ã‰Ø?????X-gar 35ul IPTG 25ul ???????????????????§Ò????????????????????50???????????? ?????????2????????????????? 37??????????? 4??????????????????????????35-45??? ???????????? 1??????????????Xgar??IPTG?????????????? 2???????????????????????????????????????2???? ????????????????????????§Õ????????????????????§Ñ????????????????????????????????????????? http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=7993559&sty=1&tpg=1&age=-1 [ Last edited by zhaolixia0814 on 2009-7-23 at 08:16 ] |
» ÊÕ¼±¾ÌûµÄÌÔÌûר¼ÍƼö
±í¹ÛÒÅ´« |
» ²ÂÄãϲ»¶
ÊÛSCIÒ»ÇøT0PÎÄÕ£¬ÎÒ:8O.55.1.O.5.4,¿ÆÄ¿ÆëÈ«,¿É+¼±
ÒѾÓÐ5È˻ظ´
ÊÛSCI-T0PÎÄÕ£¬ÎÒ:8O.5.5.1.O.54,¿ÆÄ¿ÆëÈ«,¿É+¼±
ÒѾÓÐ7È˻ظ´
ÉϺ£¹¤³Ì¼¼Êõ´óѧ ¼¤¹âÖÇÄÜÖÆÔì¿ÎÌâ×é 2027¼¶²©Ê¿Ñо¿ÉúÕÐÉú
ÒѾÓÐ6È˻ظ´
¿ÎÌâ×éÕÐ2027¼¶²©Ê¿ ÉϺ£¹¤³Ì¼¼Êõ´óѧ ¼¤¹âÖÇÄÜÖÆÔì·½Ïò
ÒѾÓÐ6È˻ظ´
ÏÖ´ú¡±Ñ§·§¡±¸ÃÈçºÎ½ç¶¨
ÒѾÓÐ14È˻ظ´
ʦµÜÂÛÎļû¿¯´ó°ëÄê²ÅÏëÆðÀ´ÉêÇëרÀû£¬»¹ÄÜÇÀ¾ÈÒ»ÏÂÂð£¿
ÒѾÓÐ4È˻ظ´
ÓлúºÏ³ÉÒÔºó»á²»»á±»AI¸Ä±ä£¿×ö¿ÆÑеijæÓÑÔõô¿´
ÒѾÓÐ8È˻ظ´
ÎÒµÄÄÌÄÌ
ÒѾÓÐ3È˻ظ´
» ±¾Ö÷ÌâÏà¹ØÉ̼ÒÍÆ¼ö: (ÎÒÒ²ÒªÔÚÕâÀïÍÆ¹ã)
ligl234
гæ (СÓÐÃûÆø)
- Ó¦Öú: 1 (Ó×¶ùÔ°)
- ½ð±Ò: 1491.6
- Ìû×Ó: 168
- ÔÚÏß: 84.1Сʱ
- ³æºÅ: 819288
- ×¢²á: 2009-07-31
- רҵ: »ùÒò±í´ïµ÷¿ØÓë±í¹ÛÒÅ´«Ñ§
5Â¥2009-08-16 20:27:22
zhaolixia0814
½ð³æ (СÓÐÃûÆø)
- Ó¦Öú: 0 (Ó×¶ùÔ°)
- ½ð±Ò: 517.6
- Ìû×Ó: 199
- ÔÚÏß: 4.2Сʱ
- ³æºÅ: 516821
- ×¢²á: 2008-03-03
- ÐÔ±ð: MM
- רҵ: ÐóÄÁѧ
2Â¥2009-07-24 07:38:29
zhaolixia0814
½ð³æ (СÓÐÃûÆø)
- Ó¦Öú: 0 (Ó×¶ùÔ°)
- ½ð±Ò: 517.6
- Ìû×Ó: 199
- ÔÚÏß: 4.2Сʱ
- ³æºÅ: 516821
- ×¢²á: 2008-03-03
- ÐÔ±ð: MM
- רҵ: ÐóÄÁѧ
3Â¥2009-07-26 07:54:41
ÈýÁ×ËáÏÙÜÕ
Ìú¸Ëľ³æ (Ö°Òµ×÷¼Ò)
- BioEPI: 3
- Ó¦Öú: 1 (Ó×¶ùÔ°)
- ¹ó±ö: 0.021
- ½ð±Ò: 7298.5
- É¢½ð: 9
- ºì»¨: 13
- Ìû×Ó: 4032
- ÔÚÏß: 224.7Сʱ
- ³æºÅ: 551611
- ×¢²á: 2008-04-27
- ÐÔ±ð: GG
- רҵ: Éñ¾ÏµÍ³Ö×Áö£¨º¬ÌØÊâ¸ÐÊÜ
¡ï
Сľ³æ(½ð±Ò+0.5):¸ø¸öºì°ü£¬Ð»Ð»»ØÌû½»Á÷
Сľ³æ(½ð±Ò+0.5):¸ø¸öºì°ü£¬Ð»Ð»»ØÌû½»Á÷
| ÍÆ¼öÓÃQIAGENµÄÐÞÊÎÊÔ¼ÁºÐ£¬¼òµ¥²»ÕÛÌÚ£¬Íê±Ï |
6Â¥2009-08-16 20:42:18










»Ø¸´´ËÂ¥

