24СʱŰа    

61/1б
鿴: 1034  |  ظ: 5
ǰѾ浵

zhaolixia0814

(С)

[] [תԶ԰??] ׻ⷽκ򷨣

??protocol ????????????????????????
?????????BSP????????????????????????????DNA????????????????????????????????????????????????????????e
??????????????????????????



?????????????????????????????????????????????????????????????????????????

??????? ??????DNA???????

??????????????????????????????????DNA???????????????????????????????????????????DNA????????????????????????????????????DNA????????????
??????????DNA????????????????RNA????????????????????????????????????????K??RNA???????????
????????????
1???????K???????????????????20mg/ml??
2??RNA??????????????DNA???RNA??????????????RNA??????????????????10mg/ml????????????????????RNA????DNA?????????????????-20????
??????DNA?????????????
1??????????????OD?????
2??1%-1.5%????????????????
???????????????????????????????????????????DNA????????????Marker???????????????????????????????????

??????? ??????????????????DNA

???????????????????DDW??????????????????
1?????2ugDNA??1.5mlEP???????DDW?????50ul??
2????5.5ul?????????3M NaOH??
3?? 42????30min??
??????????
4??10mM??????????????????30ul?????????????????????????????
5?? 3.6M???????????Sigma??S9000?????????????1.88g?????????????DDW????????3M NaOH???????PH 5.0??????????5ml?????????????????????????????????NaOH????????????????????PH???????5.0????520ul???????????????
6??EP????????????????????????????????
7????200 ul ????????????????????????????
8??50??????16h??
???????4pm??????????????????5pm??????????16h??????????8am????????????????
?????????
1????????DNA???????????????????????????????????????????????????????????????4ug??
2?????????????????????????????????????????????????????
3????????????????????????????PH????5.0??????PH??????????????????????
4????????16???????????8????????????????????

???????? ????DNA????????

EP????????????????????????????
1. ??????????????????????????????????????????????????????????????1.5mlEP????
2?????????Promega Wizard Cleanup DNA????????????Promega??A7280??
1??70???????DDW??????80%???????
2????1ml Promega??s Wizard DNA Clean-up resin??????????????DNA????????????
3?????????????????????????????????????????????????????????????????????3ml-5ml???????????????????????????????????????????????????????????????????????2ml?????EP???????????????????????????????????????????????????????????????
4?????????????????????????????????????????????????2ml 80?????????????????????????????????????????????????
5??????????????????????????1.5ml??EP?????????12000rpm??2min????????????????????????????????????DNA????????????????
6??????????????????1.5mlEP????????????50ul?????DDW????????5min??
7??????12000rpm??20s??????????k???EP???????????????DNA???????????50ul??
3????5.5ul ?????????3M NaOH????????15min??
4????33ul 10M?????????NaOH??????PH??7.0?????
5????4ul 10mg/ml???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????
6????270ul ??????????????-20???????????????????????????2???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????6????????????????????6???????????????????????????
7??4???12000rpm?????30min???????????????????????????????
8????500ul 70%????????????????????????????????????????????EP??????????????????4??12000rpm??5min???????????????????????????????????????k??2??
9??????????????????????????????????EP????????????????????????????????5min?????????????????????????????????20ul-30ulDDW??????????????????????????DNA???????????????????DNA????????????????????
10??-20?C??DNA?????

???????
1?????????????????????????????????????????????????????????????
2????????????????????????????????-20??????????????????????????????????????????????4?????????????????????????
3?????????70%?????????????????????????????????????????
???????????????DNA????????????????????????????????PH?????????????????DNA????????????????PH??????????????????????????DNA?????????????????????????DNA???????????????????????????DNA??

??????? ????DNA????PCR
??????????????????????????????????????????
1??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????SCI????????????????????????????????????????????????????????????????????z??????????Genbank????????????????????????????????????????google????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????
2??Taq?????????????????????Taq??Platinum????????????????????????????????????????????????????????????????Takara??LA Taq????????????10x??mg++??LA???????????????????????Takara ?????Taq???????????????????????????????????????????????
3??PCR??????????????????95???3min??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????
4????PCR??EP????????????????????????????????????????????????????????????????????????څ???????????
5??PCR???????????????????????????????????????????????????????????????????????EP?????????????????????????????????????????????????
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????

????? PCR?????????????
????????????????????????PCR???????????????????????????????????TIANGEN?????????????????????????????????????
????????
1??PCR??????????????????????????????????????????1%-2%????
2??????DNA???????300nm??????????????????????????????????????????????????????
3?????????????????????????DNA???????
4????????DNA?????????????-20????????????????????

???????? PCR??????T??????????????????????1??????T??????????????Promega???????
15ul???
T-easy 1ul
Ligase 1ul
2xbuffer 7.5ul
DNA 5.5ul
4????????  
2?????????????
1??-70?????????????????????????????????
2?????????15ul ??????????????30?????
3??42??? 90?????
4??????2?????
5??800ul LB????????
6??280rpm??37??????45?????????????????????????????
7??8000rpm??1???????????????????100-150ul??
8????37????????????????????????????LB????????
?????X-gar 35ul
IPTG 25ul
??????????
???????????????????????????????????????????????????????????????????
3?????????????????
??????X-gar 35ul
IPTG 25ul
???????????????????????????????????????50????????????
?????????2?????????????????
37???????????
4??????????????????????????35-45???

????????????
1??????????????Xgar??IPTG??????????????
2???????????????????????????????????????2????

?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=7993559&sty=1&tpg=1&age=-1

[ Last edited by zhaolixia0814 on 2009-7-23 at 08:16 ]
ظ¥

» ¼רƼ

Ŵ

» ϲ

» ̼Ƽ: (ҲҪƹ)

  ظ¥   עTA TAϢ TA컨 TAĻ

zhaolixia0814

(С)

ûսѰ
2009-07-24 07:38:29
  ظ¥   עTA TAϢ TA컨 TAĻ

zhaolixia0814

(С)

û׻սǾͳ
2009-07-26 07:54:41
  ظ¥   עTA TAϢ TA컨 TAĻ

mhb828

ľ (д)

ģֲ
2009-07-26 10:36:35
  ظ¥   עTA TAϢ TA컨 TAĻ

ligl234

³ (С)

ллܺõĶ
2009-08-16 20:27:22
  ظ¥   עTA TAϢ TA컨 TAĻ

ľ (ְҵ)


Сľ(+0.5):лл
ƼQIAGENԼУ򵥲ڣ
2009-08-16 20:42:18
  ظ¥   עTA TAϢ TA컨 TAĻ
ذת Ҫ¥ zhaolixia0814
61/1б
ͨ è ߼ظ (ϴ)
Ϣʾ