| 查看: 1126 | 回复: 5 | ||||
| 当前主题已经存档。 | ||||
zhaolixia0814金虫 (小有名气)
|
[交流]
[转载自丁香园春雨?�?鱙 甲基化检测方法（亚硫酸氢盐修饰后测序法）
|
|||
|
??protocol ???????????????????????? ?????????BSP??????????????????????????ν??DNA?????????????????????????λ?о??????????????????????????????д裡 ?????????????????????????? ????????????о????????????????????????????????????????????????????????????? ??????? ??????DNA??????? ??????????????????????????????????DNA???????У????????????????????????????????????DNA????????????????в????????????????????DNA???????????? ??????????DNA????????????????RNA????????????????????????????????????????K??RNA??????????? ???????????? 1???????K???????????????????20mg/ml?? 2??RNA??????????????DNA???RNA??????????????RNA??????????????????10mg/ml????????????????????RNA????DNA?????????????????-20????档 ??????DNA??????????ж??? 1??????????????OD????? 2??1%-1.5%???????????????? ???????????????????????????????????????????DNA????????????Marker??????????????????????????????????Ρ? ??????? ?????????????λ?????DNA ?粻??????????????????DDW?????????????????? 1?????2ugDNA??1.5mlEP???????DDW?????50ul?? 2????5.5ul?????????3M NaOH?? 3?? 42????30min?? ?????????? 4??10mM??????????????????30ul??????????????У??????????????? 5?? 3.6M???????????Sigma??S9000?????????????1.88g?????????????DDW????????3M NaOH?ζ??????PH 5.0??????????5ml?????????????????????????????????NaOH????????????????????PH???????5.0????520ul??????????????С? 6??EP???????????????????????????????? 7????200 ul ???????????????????????????? 8??50??????16h?? ???????4pm??????????????????5pm??????????16h??????????8am???????????????? ????????? 1????????DNA?????????????????????????????????????????л??ж????????????????????4ug?? 2????????????????????????????????????????????????????? 3???????????????????????????ü?PH????5.0??????PH?????????????????????? 4????????16С???????????8С????????????λ??в?????? ???????? ???κ?DNA???????? EP???????????????????????????? 1. ???????ǹ????????????????????????????С???????????????????????????1.5mlEP???С? 2?????????Promega Wizard Cleanup DNA????????????Promega??A7280?? 1??70???????DDW??????80%??????? 2????1ml Promega??s Wizard DNA Clean-up resin??????????????DNA???????????? 3?????????????н?????????????????????????????????????????????????У???????3ml-5ml???????????????????????????????С????????????????????????????????????????2ml?????EP?????С??????????????????????????????強??????????С?????а????????????? 4???????????С???????γ??????????????С?????????????????2ml 80?????????????????????????????????????????????????衣 5???????????С????????С???????1.5ml??EP?????????12000rpm??2min???????????????????????????????????κ?DNA???????????????? 6????С??????????????1.5mlEP????????????50ul?????DDW?????·???5min?? 7??????12000rpm??20s??????????裬???EP??????弴????????κ?DNA???????????50ul?? 3????5.5ul ?????????3M NaOH?????·???15min?? 4????33ul 10M????泥????к?NaOH??????PH??7.0????? 5????4ul 10mg/ml????????????????????????????????????????????????????????????????λ???????????????????????????????????????????Щ??????????????????????????????й?????????????????????????????????????????????????ɡ? 6????270ul ??????????????-20???????????????????????????2С?????????????Щ???????á????????????????????????磬?????????????????磬???????ù??????????????Щ???????Щ???????顣????????????????????????????????Щ???????6С??????????飬??????????6С??????????????????????????? 7??4???12000rpm?????30min??????????????????????????????? 8????500ul 70%?????????????????????????????????????ɡ???????бEP??????????????????4??12000rpm??5min???????????壬????????????????????顣????????裬??2?Ρ? 9?????????壬?????????????????????????EP?????????С???????????????????????5min?????????????????????????????????20ul-30ulDDW?????????????????????????κ?DNA??????????????????κ?DNA????????????????????顣 10??-20?汣??DNA????? ??????? 1???????????????????????????????????????????С?????????????????á? 2??????李??????????????????????ú????-20????棬????????????????????????????立??????????????4?????????????к???????????? 3?????????70%????????????????????????????????????????? ???????????????DNA????????????????????????????????PH?????????????????DNA????????????????PH??????????????????????????DNA?????????????????????????DNA??????屻????????????????????κ?DNA?? ??????? ???κ?DNA????PCR ????????????䶮?????????????????????????????? 1????????????о?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????ο????????Щ?????????SCI????????????????????????????????????????????????????????????????????鵽???к???????Genbank?е????н??б?????????????????????????????????google???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? 2??Taq?????????????????????Taq??Platinum????????о????????????????????????????????????????????????????????Takara??LA Taq????????????10x??mg++??LA???????????????????????Takara ?????Taq???????????????????????????????????????ú???????? 3??PCR??????????????????95???3min????????о??????????????????????????????????????С??Χ?????????????????????????????????????????????????????? 4????PCR??EP??????????????????????????????????????仯??????????????????????????????????趨??????????С? 5??PCR???????????????????????????????????????????????????????????????????????EP???????????????????????????п?????????????????????? ?????????Щ????????????Щ???????顣?????????????????????????????????????д?Щ?????????????????????????????????Ъ???????д????????????????????? ???岿?? PCR????????????? ????????????????????????PCR???????????У?????????á???????????????TIANGEN???????ù?????????????????????????????ɡ? ???????? 1??PCR??????????????????????????????????????????1%-2%???ɡ? 2??????DNA???????300nm?????????????λ????????????????λ?????????????С???????????? 3?????????????????????????DNA??????? 4????????DNA?粻????????????-20???????????????????? ???????? PCR??????T??????????????????????1??????T???壨???????????Promega??????У? 15ul??? T-easy 1ul Ligase 1ul 2xbuffer 7.5ul DNA 5.5ul 4???????? 2????????????? 1??-70????????????????????????????????? 2?????????15ul ??????????????30????? 3??42??? 90????? 4??????2????? 5??800ul LB???????? 6??280rpm??37??????45????????????????????????????? 7??8000rpm??1?????????????????壬??100-150ul?? 8????壺37?????????????????а?????ù??????LB???????? ?????X-gar 35ul IPTG 25ul ?????????? ????????????????????????????????????????????????Χ??????????????????? 3??????????????°??? ?°壺?????X-gar 35ul IPTG 25ul ???????????????????б????????????????????50???????????? ?????????2????????????????? 37??????????? 4??????????????????????????35-45??? ???????????? 1??????????????Xgar??IPTG?????????????? 2???????????????????????????????????????2???? ????????????????????????д????????????????????а????????????????????????????????????????? http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=7993559&sty=1&tpg=1&age=-1 [ Last edited by zhaolixia0814 on 2009-7-23 at 08:16 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 表观遗传 |
» 猜你喜欢
366求调剂
已经有11人回复
-
290求调剂
已经有23人回复
-
297，工科调剂?
已经有5人回复
-
290调剂生物0860
已经有33人回复
-
一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂
已经有28人回复
-
279学硕食品专业求调剂院校
已经有28人回复
-
071000生物学调剂求助
已经有21人回复
-
279求调剂
已经有12人回复
-
调剂
已经有12人回复
-
271求调剂
已经有41人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
zhaolixia0814
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 517.6
- 帖子: 199
- 在线: 4.2小时
- 虫号: 516821
- 注册: 2008-03-03
- 性别: MM
- 专业: 畜牧学
2楼2009-07-24 07:38:29
zhaolixia0814
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 517.6
- 帖子: 199
- 在线: 4.2小时
- 虫号: 516821
- 注册: 2008-03-03
- 性别: MM
- 专业: 畜牧学
3楼2009-07-26 07:54:41
mhb828
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 7580.4
- 散金: 20
- 红花: 3
- 帖子: 1357
- 在线: 196小时
- 虫号: 314735
- 注册: 2007-02-25
- 性别: GG
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
4楼2009-07-26 10:36:35
ligl234
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1491.6
- 帖子: 168
- 在线: 84.1小时
- 虫号: 819288
- 注册: 2009-07-31
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
5楼2009-08-16 20:27:22
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
6楼2009-08-16 20:42:18
