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蛋黄酱假面

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE转膜后用考马斯亮蓝R250对凝胶染色,脱色,结果什么都没有,为什么呢? 已有2人参与

转膜后,PVDF膜上看Marker倒是都转过去了,想看转膜率怎么样就用考马斯亮蓝染色,结果凝胶染色后是变蓝了,脱色整个过程都没有条带出现,求有经验的大神指导哇!

染色液:
甲醇                     50mL
冰醋酸                   10mL
去离子水                 40mL
考马斯亮蓝R-250           0.25g

脱色液:
甲醇                     100mL
冰醋酸                   20mL
去离子水                  80mL
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junjieshao

禁虫 (小有名气)

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2楼2020-10-22 04:29:32
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追寻1993day

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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凝胶上没有蛋白就说明全部转导膜上面去了啊
3楼2020-10-22 09:04:08
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蛋黄酱假面

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by junjieshao at 2020-10-22 04:29:32
转膜后,蛋白都到膜上了,胶上没有,正常啊。
你是说用考马斯亮蓝染pvdf膜?一般用丽春红染,染后还可以继续做western blot,用了考马斯,你western 就做不了了。
没用过考马斯亮蓝染pvdf膜。

是用考染凝胶,看转膜率的。我老师说不可能一点没有
4楼2020-10-23 21:20:04
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蛋黄酱假面

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 追寻1993day at 2020-10-22 09:04:08
凝胶上没有蛋白就说明全部转导膜上面去了啊

我老师说不可能全部转过去的,怎么都得有点蛋白条带的痕迹。结果我的脱色后就是透明的凝胶,一条条带都没有
5楼2020-10-23 21:21:02
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junjieshao

禁虫 (小有名气)

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6楼2020-10-24 02:37:24
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