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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 急（RNA干扰载体转水稻以及验证问题）
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chg952

金虫 (小有名气)

[交流] 急（RNA干扰载体转水稻以及验证问题）

各位大虾：

如何验证RNA干扰载体转入水稻？有哪些转水稻的方法.比较快捷而又有效率的方法。

除了GUS活性检测，mRNA反转录做RT-PCR，还有啥可以初步检测的方法吗？

可以提DNA然后PCR检测吗？如果可以，那验证出来说明什么问题？如果不可以，那理由？干扰载体的验证跟一般转基因植株的验证有什么差别？
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1楼 2009-07-22 11:16:53
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aga0110125

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
提DNA然后PCR检测只能证明转基因是否成功，不能放映干扰的效果，只是GUS的进一步确定检测而已，一般都要做你所干扰基因的real-time检测和之后的表型结果检测的。
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2楼2009-07-22 14:34:05
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六妖妖

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
主要还是表达量的差异吧。干扰成功后被干扰的基因表达量应该是下调，需要用RNA来做。普通转基因只要验证转入基因是否有表达，直接提DNA做就好。
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3楼2009-07-22 20:39:45
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aga0110125

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
DNA是不能证明表达的，很多实验目的基因转入成功，但是并不表达，这与基因插入的位置等等很多因素相关，就算带了35S启动子，也不一定表达的，所以严谨点，后面要检测表达结果，一般north还是必要的，如果不想测real time的话

[ Last edited by aga0110125 on 2009-7-23 at 09:51 ]
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4楼2009-07-23 09:49:11
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kinglong09

木虫 (小有名气)
楼上说的很好，支持
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5楼2009-07-24 15:47:54
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