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chg952

金虫 (小有名气)

[交流] 急(RNA干扰载体转水稻以及验证问题)

各位大虾:

如何验证RNA干扰载体转入水稻?有哪些转水稻的方法.比较快捷而又有效率的方法。

除了GUS活性检测,mRNA反转录做RT-PCR,还有啥可以初步检测的方法吗?

可以提DNA然后PCR检测吗?如果可以,那验证出来说明什么问题?如果不可以,那理由?干扰载体的验证跟一般转基因植株的验证有什么差别?
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aga0110125

银虫 (小有名气)


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提DNA然后PCR检测只能证明转基因是否成功,不能放映干扰的效果,只是GUS的进一步确定检测而已,一般都要做你所干扰基因的real-time检测和之后的表型结果检测的。
2楼2009-07-22 14:34:05
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六妖妖

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
主要还是表达量的差异吧。干扰成功后被干扰的基因表达量应该是下调,需要用RNA来做。普通转基因只要验证转入基因是否有表达,直接提DNA做就好。
3楼2009-07-22 20:39:45
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aga0110125

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
DNA是不能证明表达的,很多实验目的基因转入成功,但是并不表达,这与基因插入的位置等等很多因素相关,就算带了35S启动子,也不一定表达的,所以严谨点,后面要检测表达结果,一般north还是必要的,如果不想测real time的话

[ Last edited by aga0110125 on 2009-7-23 at 09:51 ]
4楼2009-07-23 09:49:11
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kinglong09

木虫 (小有名气)

楼上说的很好,支持
5楼2009-07-24 15:47:54
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