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雨后郁金香

金虫 (小有名气)

[交流] 酶切问题求助

最近EcoRI和XhoI双酶切已连接到T载体上的目的片段(目的片段大小为400bp左右),酶切体系为50微升,如下:
buffer:5微升,
EcoRI:2微升
XhoI:2微升
质粒:21微升
水:20微升
之前做过该体系的双酶切,电泳验证均没有问题,但是这两天重复做的时候,却怎么也得不到我的目的片段。。。
说明下,前些天是做该目的片段的回收(50微升),但一直没有回收成功,于是想加大体系(100微升),便分两管50微升双酶切,可是双酶切却出现了问题。。现在不知道怎么办才好。。。希望大家给点建议。。我都重复的有点绝望了。。。。
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smallcat227

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 雨后郁金香 at 2009-7-21 22:11:



把图片上传来,但是之前一样的体系作成功过啊,只是回收时没有回收回来。。。

双酶切未成功的电泳图没有上传,还是就是第5道的?
质粒前面有杂质,可能影响了酶切反应,
可以考虑更换新的酶液试试
16楼2009-07-22 20:40:01
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anik

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
BUFFER 是否正确?
酶活力如何?
2楼2009-07-21 07:40:54
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你这两天用的质粒和前段时间用的是同一管吗?不是同一批提的质粒吧!?可能是你的质粒的质量不好,影响酶切。
一个人可以不成功,但不可以不成长!
3楼2009-07-21 08:23:14
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by anik at 2009-7-21 07:40:
BUFFER 是否正确?
酶活力如何?

之前做过一样的体系,一样的双酶切都没有问题。。。不知道这两天怎么回事,就是做不出来。。根本就没有切开。。。唉。。。
4楼2009-07-21 08:29:48
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