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三种快速支原体检测试剂盒检测原理与优缺点比较
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在细胞培养，特别是传代细胞培养中，支原体污染率达到15-35%。支原体的侵染会引起细胞功能和基因表达的严重改变，并造成持续危害。由于支原体污染会严重影响实验结果的可靠性、重复性和一致性，对支原体的常规检测非常重要。 传统的支原体检测方法很耗费时间，通常需要一天至数周，而且操作比较繁琐，准确度不高。 中国药典给定的支原体标准检测方法有两种：培养法和DNA染色法。培养法方法简单，假阳性率低，但样品需要量高，耗时20天左右，时间漫长。DNA染色法结果直观，假阳性率低，但需要荧光显微设备，实验操作复杂。 能否找到一种省时、省力且准确性高的方法检测支原体污染呢？ 目前，市场上具有多款支原体快速检测试剂盒，我们选取了其中3种品牌的快速支原体检测试剂盒，就其检测原理与优缺点进行一下比较。 一、美国CLARK Bioscience品牌一步法检测试剂盒 美国CLARK Bioscience公司研发的一步法支原体检测试剂盒One-step Quickcolor Mycoplasma Detection Kit，利用等温扩增的方法，可检测7种常见支原体的基因。 该检测方法与PCR方法类似，检测过程中，只需取少量细胞培养上清，及一个能控制温度的水浴锅或恒温金属浴，其扩增产物的颜色可通过肉眼直接观察判断，整个过程需要1小时左右。 该方法对仪器的要求比较低，理论上灵敏度比较高。缺点在于检测的支原体种类太少，目前已发现的近200种支原体，只能检测其中的7种，检测范围太窄，也不符合国家药典的规定。而且肉眼观察结果比较主观，有可能不同的实验人员判读的结果不一致。 二、美国Lonza品牌生物发光法检测试剂盒 美国Lonza品牌的MycoAlertTM 和升级的MycoAlertTM PLUS支原体检测试剂盒，采用生物发光的方法，检测支原体酶活性。其检测的支原体酶广泛存在于180多种支原体中，而不存在于真核细胞中。 该方法利用支原体酶的特定活性，进行选择性的生物化学检测。当支原体被溶解后，释放的酶与支原体检测试剂盒中提供的底物发生催化反应，将ADP转化成ATP，参与生物发光反应，并可通过分光光度计测定。如果样品添加底物后读数上升，表明存在支原体污染。整个实验过程需要20分钟左右。 该方法能够检测的支原体种类比较全，检测结果量化，容易判断，耗时短。缺点是需要配置发光仪或多功能酶标仪，知名度不如扩增法，灵敏度也可能低于扩增法。 三、苏州先达基因支原体检测试剂盒 我国苏州先达基因研发了一种细胞污染支原体检测试剂盒，从样本处理到读取检测结果只需30分钟左右。检测范围涵盖130种支原体。 其原理是基于该公司自主开发的实时荧光恒温核酸检测技术（ERA），该技术可以在恒定的低温下（25℃-42℃）对痕量的支原体种内保守性DNA片段进行特异性的扩增，样本的处理只需吸取200微升的细胞悬95℃水浴2分钟作为模板，反应体系需置于荧光定量检测仪中进行，设置温度为37℃，扩增反应可以在20分钟内完成，观察荧光定量检测仪显示的扩增曲线判读检测结果。 该方法利用了一种恒温核酸扩增方法，灵敏度比PCR高10-100倍，可以在恒定的低温条件下进行，而且用时在30分钟以内，并且检测范围涵盖130种支原体，是一种比较理想的支原体检测方法。缺点是该试剂盒需要借助荧光定量检测仪，仪器往往比较昂贵，不过先达基因推出了专用的荧光定量检测仪，该方法对温度控制元件要求不高，所以该仪器相对比较便宜而且小巧。 |
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