24小时热门版块排行榜    

查看: 10121  |  回复: 11
【悬赏金币】回答本帖问题,作者龙猫和阿里将赠送您 15 个金币

龙猫和阿里

铜虫 (初入文坛)

[求助] 拜托大佬们了,帮我看看我的条带为什么跑成哑铃状,谢谢谢谢!

各位老师们。我最近几个月WB条带一直跑的很难看,见下图。每个泳道的条带都是哑铃状,两端信号很浓呈黑点,中间信号特别淡。我的目的条带70,其他分子量的蛋白(10~100)我跑下来也是这样,只不过没有这么明显(蛋白信号强的条带就好很多不太看得出来)。问了老板和师兄师姐。还是没有找到原因。
    我每次转膜液、电泳液都是新配的,我们用millipore的PVDF膜。试了8%、10%、12%的胶都是这样
    最开始我想是不是我蛋白和loading没有混好,然后煮的时候特别注意混匀了,还是这样。
    然后考虑是不是胶现用现配的原因,所以我最近一次是配了之后过夜再跑的,还是这样。
    有师兄说是胶没配好,可我不知道哪里没配好。。。我感觉这个坎过不去了
    论坛里的各位老师们同道们,能帮我找下原因吗?拜托拜托了

拜托大佬们了,帮我看看我的条带为什么跑成哑铃状,谢谢谢谢!
WB 问题.png


拜托大佬们了,帮我看看我的条带为什么跑成哑铃状,谢谢谢谢!-1
WB 问题2.png
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

龙猫和阿里

铜虫 (初入文坛)

我来反馈啦,按之前大佬们说的,1)冲洗胶孔,我就用洗瓶对准胶孔,或者用枪头伸进孔里吹打;2)再然后配胶混匀的时候不再vortex, 而是再50mL离心管里面迅速配好之后,上下颠倒,避免剧烈摇晃起泡;3)煮蛋白的时候,loding和蛋白混匀再煮,煮完蛋白上样前一定离心,枪头吸样的时候从侧边吸,避免真有沉淀被进样。其它操作我和之前一样。现在跑胶 的哑铃形条带改善了非常多,基本没有了。还有就是,10孔跑的条带的确比15孔好看。

电泳形状之前没注意,现在到都是齐的

ps: 怎么传图回帖:想放现在的图上来对比
8楼2021-05-30 11:48:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Yuan_Gloria

新虫 (小有名气)

蛋白marker条带也是哑铃型吗?如果是的话,可以考虑胶的问题,电泳时先用低电压80V30min,再用120V60min。

发自小木虫IOS客户端
7楼2020-11-14 18:05:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junjieshao

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

2楼2020-09-11 04:06:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

破损的黄叶

新虫 (初入文坛)

5楼2020-11-13 06:41:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

破损的黄叶

新虫 (初入文坛)

6楼2020-11-13 06:42:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

龙猫和阿里

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
你好,谢谢提醒,我还真的没有冲洗过!谢谢~  (您好,显示不是应助回帖,没法送金币,我按你说的做完这次WB再来回复一次送你小红花)
3楼2020-09-12 11:41:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tanguangguo

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by junjieshao at 2020-09-11 04:06:46
胶配好后,上样前,有没有用枪把加样孔冲洗一下,里面有高浓度盐离子沉在里面,冲洗时看的很明显。

请问具体怎么冲洗加样孔呢?
4楼2020-09-22 16:17:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

免疫不发光

新虫 (小有名气)

胶的问题,催化剂是不是变色了?胶没混匀,或者蛋白讲解

发自小木虫Android客户端
9楼2021-06-23 17:37:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longweichen

新虫 (小有名气)

转膜液要在-20 度提前预冷。

发自小木虫Android客户端
欢迎交流哦~
10楼2021-08-01 08:00:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 龙猫和阿里 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 8/400 2026-09-03 14:48 by T0rGB46095mJ
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 9/450 2026-09-03 14:48 by T0rGB46095mJ
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 5/250 2026-09-03 13:55 by T0rGB46095mJ
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +10 雨打竹帘 2026-08-30 14/700 2026-09-03 13:17 by qsd10086
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 12:05 by T0rGB46095mJ
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 12:03 by T0rGB46095mJ
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 4/200 2026-09-03 03:14 by rM1TE0WVDIIY
[博后之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 6/300 2026-09-02 23:59 by rM1TE0WVDIIY
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +7 瞬息宇宙 2026-09-01 14/700 2026-09-02 17:33 by ma0526
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
信息提示
请填处理意见