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龙猫和阿里

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 拜托大佬们了，帮我看看我的条带为什么跑成哑铃状，谢谢谢谢！

各位老师们。我最近几个月WB条带一直跑的很难看，见下图。每个泳道的条带都是哑铃状，两端信号很浓呈黑点，中间信号特别淡。我的目的条带70，其他分子量的蛋白（10~100）我跑下来也是这样，只不过没有这么明显（蛋白信号强的条带就好很多不太看得出来）。问了老板和师兄师姐。还是没有找到原因。
我每次转膜液、电泳液都是新配的，我们用millipore的PVDF膜。试了8%、10%、12%的胶都是这样
最开始我想是不是我蛋白和loading没有混好，然后煮的时候特别注意混匀了，还是这样。
然后考虑是不是胶现用现配的原因，所以我最近一次是配了之后过夜再跑的，还是这样。
有师兄说是胶没配好，可我不知道哪里没配好。。。我感觉这个坎过不去了
论坛里的各位老师们同道们，能帮我找下原因吗？拜托拜托了

WB 问题.png

WB 问题2.png

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龙猫和阿里

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1楼2020-09-09 10:51:39

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我来反馈啦，按之前大佬们说的，1）冲洗胶孔，我就用洗瓶对准胶孔，或者用枪头伸进孔里吹打；2）再然后配胶混匀的时候不再vortex, 而是再50mL离心管里面迅速配好之后，上下颠倒，避免剧烈摇晃起泡；3）煮蛋白的时候，loding和蛋白混匀再煮，煮完蛋白上样前一定离心，枪头吸样的时候从侧边吸，避免真有沉淀被进样。其它操作我和之前一样。现在跑胶的哑铃形条带改善了非常多，基本没有了。还有就是，10孔跑的条带的确比15孔好看。

电泳形状之前没注意，现在到都是齐的

ps: 怎么传图回帖:想放现在的图上来对比