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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 拜托大佬们了，帮我看看我的条带为什么跑成哑铃状，谢谢谢谢！
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龙猫和阿里

铜虫 (初入文坛)

[求助] 拜托大佬们了，帮我看看我的条带为什么跑成哑铃状，谢谢谢谢！

各位老师们。我最近几个月WB条带一直跑的很难看，见下图。每个泳道的条带都是哑铃状，两端信号很浓呈黑点，中间信号特别淡。我的目的条带70，其他分子量的蛋白（10~100）我跑下来也是这样，只不过没有这么明显（蛋白信号强的条带就好很多不太看得出来）。问了老板和师兄师姐。还是没有找到原因。
    我每次转膜液、电泳液都是新配的，我们用millipore的PVDF膜。试了8%、10%、12%的胶都是这样
    最开始我想是不是我蛋白和loading没有混好，然后煮的时候特别注意混匀了，还是这样。
    然后考虑是不是胶现用现配的原因，所以我最近一次是配了之后过夜再跑的，还是这样。
    有师兄说是胶没配好，可我不知道哪里没配好。。。我感觉这个坎过不去了
    论坛里的各位老师们同道们，能帮我找下原因吗？拜托拜托了

拜托大佬们了，帮我看看我的条带为什么跑成哑铃状，谢谢谢谢！
WB 问题.png


拜托大佬们了，帮我看看我的条带为什么跑成哑铃状，谢谢谢谢！-1
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龙猫和阿里

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1楼 2020-09-09 10:51:39
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龙猫和阿里

铜虫 (初入文坛)
我来反馈啦，按之前大佬们说的，1）冲洗胶孔，我就用洗瓶对准胶孔，或者用枪头伸进孔里吹打；2）再然后配胶混匀的时候不再vortex, 而是再50mL离心管里面迅速配好之后，上下颠倒，避免剧烈摇晃起泡；3）煮蛋白的时候，loding和蛋白混匀再煮，煮完蛋白上样前一定离心，枪头吸样的时候从侧边吸，避免真有沉淀被进样。其它操作我和之前一样。现在跑胶 的哑铃形条带改善了非常多，基本没有了。还有就是，10孔跑的条带的确比15孔好看。

电泳形状之前没注意，现在到都是齐的

ps: 怎么传图回帖:想放现在的图上来对比
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8楼2021-05-30 11:48:25
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Yuan_Gloria

新虫 (小有名气)
蛋白marker条带也是哑铃型吗？如果是的话，可以考虑胶的问题，电泳时先用低电压80V30min，再用120V60min。

发自小木虫IOS客户端
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7楼2020-11-14 18:05:18
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junjieshao

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
2楼2020-09-11 04:06:46
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破损的黄叶

新虫 (初入文坛)
调用过程的形状呢

发自小木虫Android客户端
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5楼2020-11-13 06:41:48
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破损的黄叶

新虫 (初入文坛)
电泳过程的形状呢

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6楼2020-11-13 06:42:41
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普通回帖

龙猫和阿里

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
你好，谢谢提醒，我还真的没有冲洗过！谢谢~  （您好，显示不是应助回帖，没法送金币，我按你说的做完这次WB再来回复一次送你小红花）
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3楼2020-09-12 11:41:33
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tanguangguo

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by junjieshao at 2020-09-11 04:06:46
胶配好后，上样前，有没有用枪把加样孔冲洗一下，里面有高浓度盐离子沉在里面，冲洗时看的很明显。

请问具体怎么冲洗加样孔呢？
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4楼2020-09-22 16:17:56
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免疫不发光

新虫 (小有名气)
胶的问题，催化剂是不是变色了？胶没混匀，或者蛋白讲解

发自小木虫Android客户端
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9楼2021-06-23 17:37:55
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longweichen

新虫 (小有名气)
转膜液要在-20 度提前预冷。

发自小木虫Android客户端
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欢迎交流哦~
10楼2021-08-01 08:00:37
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