24小时热门版块排行榜

返回列表

【悬赏金币】回答本帖问题，作者龙猫和阿里将赠送您 15 个金币

龙猫和阿里

铜虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 137.2
散金: 8
红花: 1
帖子: 21
在线: 18.2小时
虫号: 5053176
注册: 2016-09-24
专业: 细胞信号转导

[求助] 拜托大佬们了，帮我看看我的条带为什么跑成哑铃状，谢谢谢谢！

各位老师们。我最近几个月WB条带一直跑的很难看，见下图。每个泳道的条带都是哑铃状，两端信号很浓呈黑点，中间信号特别淡。我的目的条带70，其他分子量的蛋白（10~100）我跑下来也是这样，只不过没有这么明显（蛋白信号强的条带就好很多不太看得出来）。问了老板和师兄师姐。还是没有找到原因。
我每次转膜液、电泳液都是新配的，我们用millipore的PVDF膜。试了8%、10%、12%的胶都是这样
最开始我想是不是我蛋白和loading没有混好，然后煮的时候特别注意混匀了，还是这样。
然后考虑是不是胶现用现配的原因，所以我最近一次是配了之后过夜再跑的，还是这样。
有师兄说是胶没配好，可我不知道哪里没配好。。。我感觉这个坎过不去了
论坛里的各位老师们同道们，能帮我找下原因吗？拜托拜托了

WB 问题.png

WB 问题2.png

回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

龙猫和阿里

» 猜你喜欢

到新单位后，换了新的研究方向，没有团队，持续积累2区以上论文，能申请到面上吗已经有9人回复
博士读完未来一定会好吗已经有19人回复
读博已经有4人回复
JMPT 期刊投稿流程已经有4人回复
心脉受损已经有5人回复
Springer期刊投稿求助已经有4人回复
小论文投稿已经有3人回复
Bioresource Technology期刊，第一次返修的时候被退回好几次了已经有9人回复
申请2026年博士已经有6人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

1楼2020-09-09 10:51:39

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

龙猫和阿里

铜虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 137.2
散金: 8
红花: 1
帖子: 21
在线: 18.2小时
虫号: 5053176
注册: 2016-09-24
专业: 细胞信号转导

我来反馈啦，按之前大佬们说的，1）冲洗胶孔，我就用洗瓶对准胶孔，或者用枪头伸进孔里吹打；2）再然后配胶混匀的时候不再vortex, 而是再50mL离心管里面迅速配好之后，上下颠倒，避免剧烈摇晃起泡；3）煮蛋白的时候，loding和蛋白混匀再煮，煮完蛋白上样前一定离心，枪头吸样的时候从侧边吸，避免真有沉淀被进样。其它操作我和之前一样。现在跑胶的哑铃形条带改善了非常多，基本没有了。还有就是，10孔跑的条带的确比15孔好看。

电泳形状之前没注意，现在到都是齐的

ps: 怎么传图回帖:想放现在的图上来对比