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龙猫和阿里

铜虫 (初入文坛)

[求助] 拜托大佬们了,帮我看看我的条带为什么跑成哑铃状,谢谢谢谢!

各位老师们。我最近几个月WB条带一直跑的很难看,见下图。每个泳道的条带都是哑铃状,两端信号很浓呈黑点,中间信号特别淡。我的目的条带70,其他分子量的蛋白(10~100)我跑下来也是这样,只不过没有这么明显(蛋白信号强的条带就好很多不太看得出来)。问了老板和师兄师姐。还是没有找到原因。
    我每次转膜液、电泳液都是新配的,我们用millipore的PVDF膜。试了8%、10%、12%的胶都是这样
    最开始我想是不是我蛋白和loading没有混好,然后煮的时候特别注意混匀了,还是这样。
    然后考虑是不是胶现用现配的原因,所以我最近一次是配了之后过夜再跑的,还是这样。
    有师兄说是胶没配好,可我不知道哪里没配好。。。我感觉这个坎过不去了
    论坛里的各位老师们同道们,能帮我找下原因吗?拜托拜托了

拜托大佬们了,帮我看看我的条带为什么跑成哑铃状,谢谢谢谢!
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拜托大佬们了,帮我看看我的条带为什么跑成哑铃状,谢谢谢谢!-1
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龙猫和阿里

铜虫 (初入文坛)

我来反馈啦,按之前大佬们说的,1)冲洗胶孔,我就用洗瓶对准胶孔,或者用枪头伸进孔里吹打;2)再然后配胶混匀的时候不再vortex, 而是再50mL离心管里面迅速配好之后,上下颠倒,避免剧烈摇晃起泡;3)煮蛋白的时候,loding和蛋白混匀再煮,煮完蛋白上样前一定离心,枪头吸样的时候从侧边吸,避免真有沉淀被进样。其它操作我和之前一样。现在跑胶 的哑铃形条带改善了非常多,基本没有了。还有就是,10孔跑的条带的确比15孔好看。

电泳形状之前没注意,现在到都是齐的

ps: 怎么传图回帖:想放现在的图上来对比
8楼2021-05-30 11:48:25
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Yuan_Gloria

新虫 (小有名气)

蛋白marker条带也是哑铃型吗?如果是的话,可以考虑胶的问题,电泳时先用低电压80V30min,再用120V60min。

发自小木虫IOS客户端
7楼2020-11-14 18:05:18
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junjieshao

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

2楼2020-09-11 04:06:46
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破损的黄叶

新虫 (初入文坛)

5楼2020-11-13 06:41:48
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破损的黄叶

新虫 (初入文坛)

6楼2020-11-13 06:42:41
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普通回帖

龙猫和阿里

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
你好,谢谢提醒,我还真的没有冲洗过!谢谢~  (您好,显示不是应助回帖,没法送金币,我按你说的做完这次WB再来回复一次送你小红花)
3楼2020-09-12 11:41:33
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tanguangguo

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by junjieshao at 2020-09-11 04:06:46
胶配好后,上样前,有没有用枪把加样孔冲洗一下,里面有高浓度盐离子沉在里面,冲洗时看的很明显。

请问具体怎么冲洗加样孔呢?
4楼2020-09-22 16:17:56
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免疫不发光

新虫 (小有名气)

胶的问题,催化剂是不是变色了?胶没混匀,或者蛋白讲解

发自小木虫Android客户端
9楼2021-06-23 17:37:55
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longweichen

新虫 (小有名气)

转膜液要在-20 度提前预冷。

发自小木虫Android客户端
欢迎交流哦~
10楼2021-08-01 08:00:37
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