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龙猫和阿里

铜虫 (初入文坛)

[求助] 拜托大佬们了,帮我看看我的条带为什么跑成哑铃状,谢谢谢谢!

各位老师们。我最近几个月WB条带一直跑的很难看,见下图。每个泳道的条带都是哑铃状,两端信号很浓呈黑点,中间信号特别淡。我的目的条带70,其他分子量的蛋白(10~100)我跑下来也是这样,只不过没有这么明显(蛋白信号强的条带就好很多不太看得出来)。问了老板和师兄师姐。还是没有找到原因。
    我每次转膜液、电泳液都是新配的,我们用millipore的PVDF膜。试了8%、10%、12%的胶都是这样
    最开始我想是不是我蛋白和loading没有混好,然后煮的时候特别注意混匀了,还是这样。
    然后考虑是不是胶现用现配的原因,所以我最近一次是配了之后过夜再跑的,还是这样。
    有师兄说是胶没配好,可我不知道哪里没配好。。。我感觉这个坎过不去了
    论坛里的各位老师们同道们,能帮我找下原因吗?拜托拜托了

拜托大佬们了,帮我看看我的条带为什么跑成哑铃状,谢谢谢谢!
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拜托大佬们了,帮我看看我的条带为什么跑成哑铃状,谢谢谢谢!-1
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Thegao

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 龙猫和阿里 at 2021-05-30 11:48:25
我来反馈啦,按之前大佬们说的,1)冲洗胶孔,我就用洗瓶对准胶孔,或者用枪头伸进孔里吹打;2)再然后配胶混匀的时候不再vortex, 而是再50mL离心管里面迅速配好之后,上下颠倒,避免剧烈摇晃起泡;3)煮蛋白的时候 ...

请问上样前离心需要转速时间怎么设置?
12楼2022-03-10 13:48:46
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