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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于细菌素的分离纯化
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zhangsh

金虫 (小有名气)

[交流] 关于细菌素的分离纯化

各位大侠：
       本人做的是关于短芽孢杆菌产细菌素的分离纯化，超滤对我的发酵液浓缩效果不明显，滤出液也有活性，请问有什么更好的处理大批量发酵液的浓缩办法？之后我是用透析袋浓缩，外边洒PEG20000粉末，但是处理量太小，而且在我过完离子柱即DEAE-52后收集的洗脱峰有抑菌活性，但是经透析袋浓缩（外边洒PEG20000粉)后再过完分子柱S-100后收集的蛋白峰没有抑菌活性，能帮忙分析一下原因吗？谢谢！请多多指教！
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1楼 2009-07-17 20:10:11
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lilisimahui

木虫 (小有名气)
★ ★
zhangsh(金币+2,VIP+0): 7-20 19:05
你的目的是要浓缩还是要纯化？过超滤柱是培养基上清液吗？
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无欲则刚
2楼2009-07-18 16:51:19
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zhangsh

金虫 (小有名气)
我的目的是对发酵上清浓缩后再进行纯化，以保证后续目的蛋白的得率。
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3楼2009-07-21 13:35:34
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★ ★
zhangsh(金币+2,VIP+0): 7-24 10:03
细菌素里是不是有稀有氨基酸 需不需要修饰个别氨基酸？
或者是不是你的处理破坏了这些稀有氨基酸的结构
据我所知 细菌素都是比较小肽 一般不存在高级结构吧
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
4楼2009-07-21 14:34:18
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zhangsh

金虫 (小有名气)
我现在的目的就是得到纯品好对它的结构和性质进行研究，因为不了解其氨基酸组成，所以你说的这个原因也很有可能！谢谢！请多多指教！
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5楼2009-07-24 10:05:27
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
zhangsh(金币+1,VIP+0): 8-2 15:23
离子柱不一定需要浓缩吧
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6楼2009-07-24 11:04:48
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lilisimahui

木虫 (小有名气)
★ ★
zhangsh(金币+2,VIP+0): 8-2 15:23
超滤在一定程度上就已经起到了浓缩的作用，您说“超滤液也有活性”，这样不好吗？有抑菌活性才有分纯的价值呀！我不太理解您为什么不需要这样的活性？还有，超滤是用不同的分子量进行截留，可能你的细菌素不是一种，所以你的超滤液也有抑菌活性是说的通的，即该菌产生的抑菌作用是多种细菌素共同作用的结果。
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无欲则刚
7楼2009-07-28 20:13:40
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lilisimahui

木虫 (小有名气)
★
zhangsh(金币+1,VIP+0): 8-2 15:23
基本上过完超滤后可以用旋转蒸发进行浓缩，然后再上其他类型的层析柱，就像你说的那些离子交换等等
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无欲则刚
8楼2009-07-28 20:16:11
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lilisimahui

木虫 (小有名气)
★ ★
zhangsh(金币+2,VIP+0): 8-2 15:23
你过完离子交换后有抑菌活性，那你的离子交换是用缓冲液进行洗脱的吧？有没有用缓冲液再做一个空白对照呢？因为有的时候，盐溶液也可以抑制微生物的生长。再者，如果透析袋不能很好的浓缩的话（细菌素浓度太低也可能检测不出抑菌活性），可以试试旋转蒸发浓缩，这个可以浓缩的浓度很大，但要注意条整好温度，温度太高怕你的细菌素会变性或者发生其他改变，都有可能。
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无欲则刚
9楼2009-07-28 20:21:20
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zhangsh

金虫 (小有名气)
谢谢大侠的建议，很有道理。我是用的旋转蒸发仪浓缩，效果还可以，望继续提供更多的建议！
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10楼2009-08-02 15:27:35
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