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zhangsh

金虫 (小有名气)

[交流] 关于细菌素的分离纯化

各位大侠:
       本人做的是关于短芽孢杆菌产细菌素的分离纯化,超滤对我的发酵液浓缩效果不明显,滤出液也有活性,请问有什么更好的处理大批量发酵液的浓缩办法?之后我是用透析袋浓缩,外边洒PEG20000粉末,但是处理量太小,而且在我过完离子柱即DEAE-52后收集的洗脱峰有抑菌活性,但是经透析袋浓缩(外边洒PEG20000粉)后再过完分子柱S-100后收集的蛋白峰没有抑菌活性,能帮忙分析一下原因吗?谢谢!请多多指教!
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lilisimahui

木虫 (小有名气)

★ ★
zhangsh(金币+2,VIP+0): 7-20 19:05
你的目的是要浓缩还是要纯化?过超滤柱是培养基上清液吗?
无欲则刚
2楼2009-07-18 16:51:19
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zhangsh

金虫 (小有名气)

我的目的是对发酵上清浓缩后再进行纯化,以保证后续目的蛋白的得率。
3楼2009-07-21 13:35:34
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

优秀版主

★ ★
zhangsh(金币+2,VIP+0): 7-24 10:03
细菌素里是不是有稀有氨基酸 需不需要修饰个别氨基酸?
或者是不是你的处理破坏了这些稀有氨基酸的结构
据我所知 细菌素都是比较小肽 一般不存在高级结构吧
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
4楼2009-07-21 14:34:18
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zhangsh

金虫 (小有名气)

我现在的目的就是得到纯品好对它的结构和性质进行研究,因为不了解其氨基酸组成,所以你说的这个原因也很有可能!谢谢!请多多指教!
5楼2009-07-24 10:05:27
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


zhangsh(金币+1,VIP+0): 8-2 15:23
离子柱不一定需要浓缩吧
6楼2009-07-24 11:04:48
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lilisimahui

木虫 (小有名气)

★ ★
zhangsh(金币+2,VIP+0): 8-2 15:23
超滤在一定程度上就已经起到了浓缩的作用,您说“超滤液也有活性”,这样不好吗?有抑菌活性才有分纯的价值呀!我不太理解您为什么不需要这样的活性?还有,超滤是用不同的分子量进行截留,可能你的细菌素不是一种,所以你的超滤液也有抑菌活性是说的通的,即该菌产生的抑菌作用是多种细菌素共同作用的结果。
无欲则刚
7楼2009-07-28 20:13:40
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lilisimahui

木虫 (小有名气)


zhangsh(金币+1,VIP+0): 8-2 15:23
基本上过完超滤后可以用旋转蒸发进行浓缩,然后再上其他类型的层析柱,就像你说的那些离子交换等等
无欲则刚
8楼2009-07-28 20:16:11
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lilisimahui

木虫 (小有名气)

★ ★
zhangsh(金币+2,VIP+0): 8-2 15:23
你过完离子交换后有抑菌活性,那你的离子交换是用缓冲液进行洗脱的吧?有没有用缓冲液再做一个空白对照呢?因为有的时候,盐溶液也可以抑制微生物的生长。再者,如果透析袋不能很好的浓缩的话(细菌素浓度太低也可能检测不出抑菌活性),可以试试旋转蒸发浓缩,这个可以浓缩的浓度很大,但要注意条整好温度,温度太高怕你的细菌素会变性或者发生其他改变,都有可能。
无欲则刚
9楼2009-07-28 20:21:20
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zhangsh

金虫 (小有名气)

谢谢大侠的建议,很有道理。我是用的旋转蒸发仪浓缩,效果还可以,望继续提供更多的建议!
10楼2009-08-02 15:27:35
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