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植物硝酸盐还原酶NR的测定
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参考了各种文献和《植物生理生化实验技术》的提取和测定方法，但是为什么粗酶液+硝酸钾溶液+NADH在25℃保温30min后，检测出空白对照组(图左)的亚硝酸盐浓度比总是比各类实验组还要高？(表现在粉红色深浅和吸光度) 检测的大致过程如下: 1.新鲜叶片冷冻30min后加入1ml pH7.5磷酸缓冲液用高通量研磨机匀浆。 2.再向离心管内补加2ml 磷酸缓冲液，混匀，用冷冻离心机4℃，17000xg离心15min。 3.取上清液0.4ml，加入0.4ml 2mg/ml的NADH和1.2ml 0.1mol/L硝酸钾。对照组加入0.8ml磷酸缓冲液和1.2ml硝酸钾。 4.25℃水浴保温30min，加入0.4ml乙酸锌，混匀后8000xg离心10min 5.上清液加入1ml 1%磺胺(含3mol/L盐酸)和1ml 0.02%盐酸萘乙二胺，显色15min，540nm测吸光度 提取过程尽量都在冰水浴中完成的。实验用的磷酸缓冲液和去离子水等都未检测出亚硝酸盐。硝酸钾是新购置的药品，理论上不应有亚硝酸盐污染，但是对照组本身也是应当在检测过程中作为试剂空白消去的，结果对照组的亚硝酸盐含量比实验组还高就非常奇怪 请问是否是实验过程中哪里存在问题?或是什么原因导致这样的结果  发自小木虫Android客户端 |
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