[交流] 蛋白诱导表达已有4人参与

» 猜你喜欢

之前让一硕士生水了7个发明专利，现在这7个获批发明专利的维护费可从哪儿支出哈？已经有5人回复
博士读完未来一定会好吗已经有29人回复
博士申请都是内定的吗？已经有5人回复
到新单位后，换了新的研究方向，没有团队，持续积累2区以上论文，能申请到面上吗已经有12人回复
投稿精细化工已经有4人回复
高职单位投计算机相关的北核或SCI四区期刊推荐，求支招！已经有4人回复
导师想让我从独立一作变成了共一第一已经有9人回复
读博已经有4人回复
JMPT 期刊投稿流程已经有4人回复
心脉受损已经有5人回复

1楼2020-07-29 09:53:25

眼泪成诗

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 57
帖子: 18
在线: 2.3小时
虫号: 6379270
注册: 2017-04-23
专业: 微生物学

引用回帖:

3楼: Originally posted by 雨独步 at 2020-07-29 13:04:44
除了楼上说的，你的蛋白是从什么物种来的，要在什么物种里面表达，是否经过密码子优化？

都是原核,农杆菌和大肠杆菌

发自小木虫IOS客户端

4楼2020-07-31 10:40:01

查看全部 9 个回答

apple870502

木虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 3994.5
红花: 2
帖子: 186
在线: 131.8小时
虫号: 1272475
注册: 2011-04-21
性别: MM
专业: 微生物遗传育种学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

你的问题表达不清，无法确认你是否真的“换了各种条件”，几个建议：
1、请确认你是否可以成功诱导该蛋白的表达？全菌液中是否有相应条带？
如确认可表达，需要做几个尝试，总之目的是让蛋白表达够慢，这样才不至于因表达过快而进入包涵体：
1、降低诱导温度，可16度过夜表达；
2、降低IPTG浓度，减半或减至更少，如降一个数量级；
3、若以上都试过不行，换表达菌株；
4、若表达菌株也换过不行，只能换载体了，这样就等于重头开始，比较麻烦；
5、如果实在从上清中得不到，也不想换载体重头开始，可以尝试从包涵体中纯化目的蛋白。

2楼2020-07-29 11:32:48

雨独步

铁杆木虫 (著名写手)

应助: 97 (初中生)
金币: 6560.8
散金: 349
红花: 10
帖子: 1025
在线: 442.2小时
虫号: 1333812
注册: 2011-06-29
性别: GG
专业: 生物化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

除了楼上说的，你的蛋白是从什么物种来的，要在什么物种里面表达，是否经过密码子优化？

3楼2020-07-29 13:04:44

眼泪成诗

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 57
帖子: 18
在线: 2.3小时
虫号: 6379270
注册: 2017-04-23
专业: 微生物学

引用回帖:

2楼: Originally posted by apple870502 at 2020-07-29 11:32:48
你的问题表达不清，无法确认你是否真的“换了各种条件”，几个建议：
1、请确认你是否可以成功诱导该蛋白的表达？全菌液中是否有相应条带？
如确认可表达，需要做几个尝试，总之目的是让蛋白表达够慢，这样才不至 ...

载体尝试过pet-32a和28a，也16度诱导过.iptg浓度最低尝试过0.01mM，还是不行

发自小木虫IOS客户端

5楼2020-07-31 10:42:34