| 查看: 1205 | 回复: 13 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
381466632木虫 (正式写手)
|
[交流]
制备抗体的western blot 验证问题
|
||
|
我得实验室首先构建原核表达，将我要的蛋白序列装到表达载体pGEX-4T1中，我大概算了一下，载体表达蛋白GST ,26kd .我的目的蛋白是11kd .将装有目的蛋白的重组质粒转入BL21 表达菌。挑斑诱导30度，6小时，跑蛋白胶，同时以BL21，pGEX-4T1未诱导与诱导作为对照，在37KD左右可以明显看到蛋白表达。故采用此条件大量诱导，超声提取融合蛋白。上GST珠子，用gsh 洗脱液洗脱。将洗下的蛋白进行透析纯化，进行定量以及电泳检测。采用1mg/ml与佐剂混匀注射兔子。定期采血清。ELISA检测抗体效价，当效价为1/10000时采血。取血清。 采用细菌蛋白跑western ，用抗血清1：1000可以看到明显的目的条带。由于我的基因是x物种，故想用抗血清来检测x 物种中组织中该基因是否有表达。但是组织蛋白我上了30ug 60ug 均未发现目的条带，为什么？原因出在哪？ [ Last edited by 381466632 on 2009-7-20 at 08:57 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
西南交通大学国家级人才团队2026年博士研究生招生（考核制）—机械、材料、力学方向
已经有3人回复
-
救命帖
已经有6人回复
-
存款400万可以在学校里躺平吗
已经有37人回复
-
英文综述是否需要润色及查重
已经有5人回复
-
限项规定
已经有5人回复
-
为什么nbs上溴 没有产物点出现呢
已经有9人回复
-
招博士
已经有3人回复
-
最失望的一年
已经有18人回复
poog502
木虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2799.4
- 散金: 1115
- 红花: 8
- 帖子: 953
- 在线: 492.4小时
- 虫号: 723755
- 注册: 2009-03-16
- 专业: 果树学
3楼2009-07-16 11:02:22
2楼2009-07-16 10:21:59
antibody01
金虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 897.1
- 红花: 1
- 帖子: 1362
- 在线: 28分钟
- 虫号: 802855
- 注册: 2009-07-03
- 性别: GG
- 专业: 免疫学
4楼2009-07-16 13:12:38
houjinglhy
荣誉版主 (文坛精英)
表达自由，人权之基。
- BioEPI: 1
- 应助: 21 (小学生)
- 贵宾: 0.911
- 金币: 5168.5
- 散金: 3205
- 红花: 137
- 沙发: 93
- 帖子: 10564
- 在线: 912.9小时
- 虫号: 461324
- 注册: 2007-11-18
- 专业: 生物技术药物
- 管辖: 公派出国
5楼2009-07-16 13:39:46