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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RNA浓度调整一致
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dongnong

新虫 (初入文坛)

[交流] RNA浓度调整一致

将不同处理方式的样本RNA浓度调整一致，然后进行反转录和荧光定量PCR，不明白的是如果RNA的浓度调整一致，那Ct值应该也是相同的吧，那这样的话，浓度调整一致的意义是什么呢？
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1楼 2020-07-15 17:04:38
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学而时习

金虫 (小有名气)
★
dongnong(金币+1): 谢谢参与
浓度一致，表明对照样和处理样的样本数量是一样的，这样才有可比性，保证内参基因的CT值是一样的，但不同处理会影响目的基因的表达，导致CT值出现差异，然后根据公式计算相对表达量

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2楼2020-07-15 20:23:01
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Italyhope

金虫 (正式写手)
★
dongnong(金币+1): 谢谢参与
将rna量调整成一样类似于western blot中你上样相同总量的蛋白，但是你感兴趣的蛋白在不同处理下表达量是不一样的。一样的，你的处理如果对目标基因mrna有影响，ct值又怎么会一样呢？

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3楼2020-07-15 20:27:46
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)
★
dongnong(金币+1): 谢谢参与
总量一致，内容物不一致，也就是潜在的模板不一样。所以通过ct值来反应表达量

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4楼2020-07-15 23:26:15
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dongnong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 爆炒小木虫 at 2020-07-15 23:26:15
总量一致，内容物不一致，也就是潜在的模板不一样。所以通过ct值来反应表达量

RNA浓度相同，即总量一致，若Ct值是不相同的，那是不是可以理解为相同总量RNA的目的基因的拷贝数不一样。那这样的话，RNA总量一致，拷贝数不相同的情况是由于片段长度不一致吗？可是提取过程是一样的，怎么会导致片段长度不相同呢？刚刚接触这块，请多多指教
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5楼2020-07-16 09:32:44
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dongnong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 爆炒小木虫 at 2020-07-15 23:26:15
总量一致，内容物不一致，也就是潜在的模板不一样。所以通过ct值来反应表达量

RNA浓度相同，即总量一致，若Ct值是不相同的，那是不是可以理解为相同总量RNA的目的基因的拷贝数不一样。那这样的话，RNA总量一致，拷贝数不相同的情况是由于片段长度不一致吗？可是提取过程是一样的，怎么会导致片段长度不相同呢？刚刚接触这块，请多多指教
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6楼2020-07-16 09:34:26
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dongnong at 2020-07-16 09:34:26
RNA浓度相同，即总量一致，若Ct值是不相同的，那是不是可以理解为相同总量RNA的目的基因的拷贝数不一样。那这样的话，RNA总量一致，拷贝数不相同的情况是由于片段长度不一致吗？可是提取过程是一样的，怎么会导致片 ...

影响转路水平的因素蛮多的，按照你的问题，你是指提取步骤导致的差异吗，只能说手法不一样，同一处理组的平行重复都不可能完全相同呀。

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7楼2020-07-17 01:11:15
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赤玉子

金虫 (正式写手)
★
dongnong(金币+1): 谢谢参与
最好调整一致。用核酸检测仪，OD值判断的。一般80-100
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9楼2020-07-20 11:38:14
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mikeshen1018楼
2020-07-19 11:17   回复  
dongnong(金币+1): 谢谢参与
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