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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » pCRISPomyces-2 敲除质粒构建链霉菌
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yuzhiyin

金虫 (小有名气)

[求助] pCRISPomyces-2 敲除质粒构建链霉菌 已有1人参与

利用pCRISPomyces-2 敲除单个基因，2kb同源臂的设置，是在spacer上下游各设置1kb的同源臂，想问下是紧挨着spacer+PAM上下设置吗，如果这样设置是不是就是只敲除了27bp,还是也可以不紧挨着设置？
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做人事，看天命！
1楼 2020-07-09 08:58:44
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Jopersen

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主做出来了嘛？我连上下游各1KB的片段P都P不出来 ，后来就没设同源臂去敲单基因了，到现在没有拿到突变体，不知道能不能毕业 ！慌得一批
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6楼2020-10-16 10:58:31
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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)
可以不紧挨着设计，链霉菌基因敲除不好做啊

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2楼2020-07-09 10:50:13
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yuzhiyin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by forhighbio at 2020-07-09 10:50:13
可以不紧挨着设计，链霉菌基因敲除不好做啊

请教下，不挨着空多大都可以吗？有没有大小要求，上下游几kb可以
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做人事，看天命！
3楼2020-07-09 14:07:07
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Pioneer X

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuzhiyin at 2020-07-09 14:07:07
请教下，不挨着空多大都可以吗？有没有大小要求，上下游几kb可以...

同源臂中间的部分是敲除的

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4楼2020-08-21 18:05:23
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