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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » pCRISPomyces-2 敲除质粒构建链霉菌
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yuzhiyin

金虫 (小有名气)

[求助] pCRISPomyces-2 敲除质粒构建链霉菌 已有1人参与

利用pCRISPomyces-2 敲除单个基因，2kb同源臂的设置，是在spacer上下游各设置1kb的同源臂，想问下是紧挨着spacer+PAM上下设置吗，如果这样设置是不是就是只敲除了27bp,还是也可以不紧挨着设置？
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做人事，看天命！
1楼 2020-07-09 08:58:44
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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)
可以不紧挨着设计，链霉菌基因敲除不好做啊

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2楼2020-07-09 10:50:13
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yuzhiyin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by forhighbio at 2020-07-09 10:50:13
可以不紧挨着设计，链霉菌基因敲除不好做啊

请教下，不挨着空多大都可以吗？有没有大小要求，上下游几kb可以
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做人事，看天命！
3楼2020-07-09 14:07:07
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Pioneer X

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuzhiyin at 2020-07-09 14:07:07
请教下，不挨着空多大都可以吗？有没有大小要求，上下游几kb可以...

同源臂中间的部分是敲除的

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4楼2020-08-21 18:05:23
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Jopersen

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by forhighbio at 2020-07-09 10:50:13
可以不紧挨着设计，链霉菌基因敲除不好做啊

哎，这位兄台也是做这个嘛?我要耗死在这个上面了。实验室人没做过  我一个小硕单独建体系  我太难了 快毕业了  一个突变体筛不到  
太难了！
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5楼2020-10-16 10:55:38
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Jopersen

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主做出来了嘛？我连上下游各1KB的片段P都P不出来 ，后来就没设同源臂去敲单基因了，到现在没有拿到突变体，不知道能不能毕业 ！慌得一批
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6楼2020-10-16 10:58:31
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xhl1024

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Jopersen at 2020-10-16 10:55:38
哎，这位兄台也是做这个嘛?我要耗死在这个上面了。实验室人没做过  我一个小硕单独建体系  我太难了 快毕业了  一个突变体筛不到  
太难了！...

咱们做链霉菌的可以交流下，或者建个群我也要耗死了
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7楼2021-11-04 15:20:11
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张永婧1991

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xhl1024 at 2021-11-04 15:20:11
咱们做链霉菌的可以交流下，或者建个群我也要耗死了...

请问各位大神，后来做了链霉菌基因敲除吗，想咨询方法，感激不尽
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8楼2023-05-23 20:03:49
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虹之间的停留

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Jopersen at 2020-10-16 10:58:31
楼主做出来了嘛？我连上下游各1KB的片段P都P不出来 ，后来就没设同源臂去敲单基因了，到现在没有拿到突变体，不知道能不能毕业 ！慌得一批

请问； 连上下游各1KB的片段P都P不出来-这个问题最后解决了吗？目前也遇到了这个问题
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9楼2023-07-17 15:20:46
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