24小时热门版块排行榜    

查看: 730  |  回复: 5
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

2008314

[交流] 请教Western Blot有关问题

各位虫友:

我最近在做Western Blot,其中有些问题不太明白,希望做过这个的指教一下:

1) 浓缩胶起什么作用?

2) 转膜时,滤纸起什么作用,是不是必须要用特定的滤纸,一般定性或定量用来过滤的滤纸行不行?

3) 32KD的蛋白湿转需要用多大电流和多长的时间?

[ Last edited by 2008314 on 2009-7-14 at 09:46 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baisuilan

金虫 (正式写手)

32kd湿转,我们用200mA一个半小时,或者180mA三小时。肯定没问题。
5楼2009-07-14 12:29:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

antibody01

金虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
350784478(金币+1,VIP+0):感谢回帖 7-14 09:42
2008314(金币+3,VIP+0):谢谢交流,不过第三个问题还没回答 7-14 09:49
1)浓缩蛋白样品
2)保持胶与膜的密切接触,避免气泡。普通滤纸就行。
3)我们采用半干转,浓缩胶80V,分离胶120V.时间需要参考Marker位置。
生活就像强奸,无法反抗就要学会享受; 工作就像轮奸,你不行就要别人上; 社会就像自慰,一切都要靠自己的双手解决。
2楼2009-07-14 09:06:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolixia0814

金虫 (小有名气)

32KD的蛋白湿转需要用多大电流和多长的时间?

100kD以下的蛋白半干转效果比较好.  100mA,半个多小时左右吧。一般来讲,0.8-3.0mA/CM2
3楼2009-07-14 10:14:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


2008314(金币+1,VIP+0):3Q 7-14 15:44
不一定每个实验室都有半干转的仪器
考虑到转内参(32KD一般用50KD的tublin做内参吧),可以用恒压100V冰上转1h,这样绝对转过去了。
室温转可以试试30~40min
4楼2009-07-14 10:20:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 24/1200 2026-08-16 10:16 by 启萌科技
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +31 医学老男孩 2026-08-13 70/3500 2026-08-16 08:29 by 医学老男孩
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见