24小时热门版块排行榜    

查看: 736  |  回复: 5
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

2008314

[交流] 请教Western Blot有关问题

各位虫友:

我最近在做Western Blot,其中有些问题不太明白,希望做过这个的指教一下:

1) 浓缩胶起什么作用?

2) 转膜时,滤纸起什么作用,是不是必须要用特定的滤纸,一般定性或定量用来过滤的滤纸行不行?

3) 32KD的蛋白湿转需要用多大电流和多长的时间?

[ Last edited by 2008314 on 2009-7-14 at 09:46 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolixia0814

金虫 (小有名气)

32KD的蛋白湿转需要用多大电流和多长的时间?

100kD以下的蛋白半干转效果比较好.  100mA,半个多小时左右吧。一般来讲,0.8-3.0mA/CM2
3楼2009-07-14 10:14:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

antibody01

金虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
350784478(金币+1,VIP+0):感谢回帖 7-14 09:42
2008314(金币+3,VIP+0):谢谢交流,不过第三个问题还没回答 7-14 09:49
1)浓缩蛋白样品
2)保持胶与膜的密切接触,避免气泡。普通滤纸就行。
3)我们采用半干转,浓缩胶80V,分离胶120V.时间需要参考Marker位置。
生活就像强奸,无法反抗就要学会享受; 工作就像轮奸,你不行就要别人上; 社会就像自慰,一切都要靠自己的双手解决。
2楼2009-07-14 09:06:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


2008314(金币+1,VIP+0):3Q 7-14 15:44
不一定每个实验室都有半干转的仪器
考虑到转内参(32KD一般用50KD的tublin做内参吧),可以用恒压100V冰上转1h,这样绝对转过去了。
室温转可以试试30~40min
4楼2009-07-14 10:20:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baisuilan

金虫 (正式写手)

32kd湿转,我们用200mA一个半小时,或者180mA三小时。肯定没问题。
5楼2009-07-14 12:29:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
请填处理意见