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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 求助：绝对回收率到底怎么算才对？？
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sunway126

[交流] 求助：绝对回收率到底怎么算才对？？

首先，提一个问题：取180ul空白血浆，加20ul药物A（50ug/ml），再加50ul内标（20ug/ml），涡旋，加提取溶剂乙醚（乙酸乙酯等）1ml，涡旋，离心后，取上清提取溶剂0.8ml，吹干，用100ul流动相复溶，离心后，取10ul进样。峰面积为AS1。问：药物A的绝对回收率，提取回收率，准确度，基质效应分别怎么计算？



常见的绝对回收率计算方法：

方法a：因为血药浓度近似为：50/(180+20)=5ug/ml，最后复溶量为100ul，就相当于200ul的血浆最后变成了100ul，故复溶液中的血药浓度应该为10ug/ml，接下来进样储备液中10ug/ml的标液得到峰面积AS2，用AS1*(1/0.8)/AS2*100%=绝对回收率（在液相色谱中，基质效应为0，而提取回收率等于绝对回收率）。

方法b：取200ul纯水，涡旋，加提取溶剂乙醚（乙酸乙酯等）1ml，涡旋，离心后，取上清提取溶剂0.8ml，吹干，加20ul药物A（50ug/ml）后，再加80ul流动相复溶，离心后，取10ul进样。峰面积为AS3，用AS1*(1/0.8)/AS3*100%=绝对回收率。



问题：a：上述两种方法哪种更合理？

         b：方法a和b中所乘的系数（1/0.8）是否有科学依据？

         c：方法a中血药浓度应该是（180+20）的血浆近似算法呢，还是（200+20）近似算法呢，或者是先将20ul药物A溶液吹干后再加200ul空白血浆？？
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1楼 2009-07-12 20:19:10
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cucupig

银虫 (小有名气)
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karl2100(金币+2,VIP+0):谢谢指教！ 7-13 19:42
我们实验室常用的计算方法是：
1.空白血浆180ul,标液A 20ul,内标50ul, 提取溶剂1ml，涡旋，离心后，取上清提取溶剂0.8ml，吹干，用100ul流动相复溶，离心后，取10ul进样。样品峰面积As1,内标峰面积As2，比值R=As1/As2
2.流动相200ul，提取溶剂1ml，涡旋，离心后，取上清提取溶剂0.8ml，标液A 20ul,内标50ul，吹干，用100ul流动相复溶，离心后，取10ul进样。样品峰面积As2
3.空白血浆200ul, 提取溶剂1ml，涡旋，离心后，取上清提取溶剂0.8ml，标液A 20ul,内标50ul, 吹干，用100ul流动相复溶，离心后，取10ul进样。样品峰面积As3
下面看计算公式：
基质效应=As3/As2*100
绝对回收率=As1/As3*1/0.8
相对回收率=R带入标曲算出测定浓度/理论浓度*100
因为2，3，步骤中都是在0.8ml中加入标液和内标，所以不需要*1/8,而步骤1中是在之前加入内标和标液，提取后只取出了0.8ml,表也和内标都有损失，所以计算绝对回收率时需要折算。
不知道我这样解释是否清楚。
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2楼2009-07-13 11:40:50
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cucupig

银虫 (小有名气)
不好意思，写错字了“提取后只取出了0.8ml,标液和内标都有损失”
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3楼2009-07-13 11:42:01
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cucupig

银虫 (小有名气)
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血药浓度计算：
血药浓度=加入药物浓度*加入药物体积/血浆体积
一般血浆中要求加入药物溶液体积要小，不能对血浆造成明显的稀释，就像楼主是加入了20ul,所以计算血浆浓度时是按照上面公式计算近似值。
也有人是计算准确的血浆浓度的，把加入标液体积也算进去的。
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4楼2009-07-13 11:45:58
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sunway126

引用回帖:
Originally posted by cucupig at 2009-7-13 11:40:
我们实验室常用的计算方法是：
1.空白血浆180ul,标液A 20ul,内标50ul, 提取溶剂1ml，涡旋，离心后，取上清提取溶剂0.8ml，吹干，用100ul流动相复溶，离心后，取10ul进样。样品峰面积As1,内标峰面积As2，比值R=As ...

好的，非常感谢
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5楼2009-07-13 20:48:39
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kkbyb

木虫 (著名写手)
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karl2100(金币+1,VIP+0):多谢提供！ 7-14 22:23
引用回帖:
Originally posted by cucupig at 2009-7-13 11:45:
血药浓度计算：
血药浓度=加入药物浓度*加入药物体积/血浆体积
一般血浆中要求加入药物溶液体积要小，不能对血浆造成明显的稀释，就像楼主是加入了20ul,所以计算血浆浓度时是按照上面公式计算近似值。
也有人是 ...

此为血药浓度计算正解，发现好多分析改做体内的不理解“血”药浓度和分析液浓度，另外回收率的分母问题，用相同浓度的标液加在萃取后吹干的残渣里，所以一般不会去稀释血药浓度，就是因为浓缩或稀释后分母要另配，麻烦。试问将回收率分母标液加在萃取上层中在吹干过程中的损失怎么计算？计算的回收率偏高。
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6楼2009-07-13 21:28:55
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cucupig

银虫 (小有名气)
★
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计算绝对回收率偏高不一定是吹干过程的损失问题，更大可能是由于离子源的基质效应产生的，还有可能是吹干的时候要注意吹头污染，从低浓度向高浓度吹，质谱响应非常灵敏，残留一点就会造成大的误差。我们试验中好像没有发现吹干对回收率有太大影响。生物样本允许误差范围大75%——125%，在这个范围内就ok了。
相对回收率偏高有可能是带入的随行标准曲线斜率有问题，计算出来的回收率都大或者都小。
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7楼2009-07-14 09:23:02
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