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求助：绝对回收率到底怎么算才对？？
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首先，提一个问题：取180ul空白血浆，加20ul药物A（50ug/ml），再加50ul内标（20ug/ml），涡旋，加提取溶剂乙醚（乙酸乙酯等）1ml，涡旋，离心后，取上清提取溶剂0.8ml，吹干，用100ul流动相复溶，离心后，取10ul进样。峰面积为AS1。问：药物A的绝对回收率，提取回收率，准确度，基质效应分别怎么计算？ 常见的绝对回收率计算方法： 方法a：因为血药浓度近似为：50/(180+20)=5ug/ml，最后复溶量为100ul，就相当于200ul的血浆最后变成了100ul，故复溶液中的血药浓度应该为10ug/ml，接下来进样储备液中10ug/ml的标液得到峰面积AS2，用AS1*(1/0.8)/AS2*100%=绝对回收率（在液相色谱中，基质效应为0，而提取回收率等于绝对回收率）。 方法b：取200ul纯水，涡旋，加提取溶剂乙醚（乙酸乙酯等）1ml，涡旋，离心后，取上清提取溶剂0.8ml，吹干，加20ul药物A（50ug/ml）后，再加80ul流动相复溶，离心后，取10ul进样。峰面积为AS3，用AS1*(1/0.8)/AS3*100%=绝对回收率。 问题：a：上述两种方法哪种更合理？ b：方法a和b中所乘的系数（1/0.8）是否有科学依据？ c：方法a中血药浓度应该是（180+20）的血浆近似算法呢，还是（200+20）近似算法呢，或者是先将20ul药物A溶液吹干后再加200ul空白血浆？？ |
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karl2100(金币+2,VIP+0):谢谢指教！ 7-13 19:42
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我们实验室常用的计算方法是： 1.空白血浆180ul,标液A 20ul,内标50ul, 提取溶剂1ml，涡旋，离心后，取上清提取溶剂0.8ml，吹干，用100ul流动相复溶，离心后，取10ul进样。样品峰面积As1,内标峰面积As2，比值R=As1/As2 2.流动相200ul，提取溶剂1ml，涡旋，离心后，取上清提取溶剂0.8ml，标液A 20ul,内标50ul，吹干，用100ul流动相复溶，离心后，取10ul进样。样品峰面积As2 3.空白血浆200ul, 提取溶剂1ml，涡旋，离心后，取上清提取溶剂0.8ml，标液A 20ul,内标50ul, 吹干，用100ul流动相复溶，离心后，取10ul进样。样品峰面积As3 下面看计算公式： 基质效应=As3/As2*100 绝对回收率=As1/As3*1/0.8 相对回收率=R带入标曲算出测定浓度/理论浓度*100 因为2，3，步骤中都是在0.8ml中加入标液和内标，所以不需要*1/8,而步骤1中是在之前加入内标和标液，提取后只取出了0.8ml,表也和内标都有损失，所以计算绝对回收率时需要折算。 不知道我这样解释是否清楚。 |
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