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油条vs豆浆

新虫 (小有名气)

[求助] 金纳米棒修饰DNA 已有1人参与

大家好,我最近尝试往金纳米棒上修饰巯基化DNA,利用的是低pH高盐法修饰,从紫外上能看到260有明显的DNA吸收峰,合成之后的产物也非常稳定,多次离心都能很好地收集到产物(应该不存在DNA脱落等因素);
但是在尝试结合互补链DNA的时候却一直都不能够成功(验证方式:1. 紫外看产物260吸收峰无明显变化;2.投入与修饰探针等量的互补链DNA,在结合后未发现上清中DNA含量变少),想请教下大家这是哪方面出问题了?
尝试过的影响因素:1、DNA在金纳米棒上的修饰比例;2、反应的温度、pH等
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supernatural

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
油条vs豆浆: 金币+20, ★★★很有帮助 2020-06-17 13:50:51
存在位阻,DNA不容易互补配对
你可以尝试先让DNA互补配对,再把双链DNA连接到金表面
人生仿佛像一棵大树,需要风雨的洗礼才能茁壮成熟。
2楼2020-06-12 17:24:03
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3楼2020-06-13 04:16:38
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4楼2020-06-13 04:16:56
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油条vs豆浆

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by supernatural at 2020-06-12 17:24:03
存在位阻,DNA不容易互补配对
你可以尝试先让DNA互补配对,再把双链DNA连接到金表面

谢谢建议,你的这种方法我也尝试过,但似乎DNA双链在低pH高盐环境下容易解链,没能成功把互补链留住;我后续再尝试下直接修饰吧,就是时间相对长一点。
另外,想和你探讨一下关于这个DNA链的空间位阻影响,这种位阻是不是主要是DNA链离金表面太近,如果我把spacer序列长度加大一点,是不是会一定程度消除这种影响?其实我原来已经加了5个A了,我现在计划再加一点,因为我的实验这个互补链上还需要继续加互补链,做杂交链反应形成个长链聚合物,所以还是优先想考虑解决这个位阻问题
5楼2020-06-17 10:27:06
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supernatural

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引用回帖:
5楼: Originally posted by 油条vs豆浆 at 2020-06-17 10:27:06
谢谢建议,你的这种方法我也尝试过,但似乎DNA双链在低pH高盐环境下容易解链,没能成功把互补链留住;我后续再尝试下直接修饰吧,就是时间相对长一点。
另外,想和你探讨一下关于这个DNA链的空间位阻影响,这种位 ...

位阻主要是静电排斥和空间位阻,如果你后期还要加互补链,我觉得还是先杂交再偶联好些,只要设计的互补碱基超过10个,我感觉杂交后的双链没有那么容易解链。关于加spacer,已经加了spacer了,再加spacer感觉影响应该不是很大。
人生仿佛像一棵大树,需要风雨的洗礼才能茁壮成熟。
6楼2020-06-17 11:18:49
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油条vs豆浆

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by supernatural at 2020-06-17 11:18:49
位阻主要是静电排斥和空间位阻,如果你后期还要加互补链,我觉得还是先杂交再偶联好些,只要设计的互补碱基超过10个,我感觉杂交后的双链没有那么容易解链。关于加spacer,已经加了spacer了,再加spacer感觉影响应 ...

好的,谢谢
7楼2020-06-17 13:50:38
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慧儿~

铜虫 (小有名气)

可以留个联系方式吗  我最近也遇到了这样的问题
8楼2020-11-04 08:42:43
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zz1120099

新虫 (小有名气)

同求联系方式,最近也在做这个

发自小木虫Android客户端
9楼2021-07-23 14:40:54
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allsw

木虫 (正式写手)

送红花一朵
楼主 我也在做这方面的实验,能留个方式方便沟通吗?
10楼2021-11-20 11:51:44
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