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stella0xhx

新虫 (小有名气)

[交流] 基因带六个his标签,蛋白纯化时为何挂不上镍柱已有9人参与

克隆了一个肠激酶的基因,设计引物时加了6个his,蛋白可溶性还行,可是做蛋白纯化时,用的镍柱,但是目标蛋白就是挂不上柱,磷酸盐和tris-Hcl 的缓冲液都试过了,没法,请教各位高手,怎么办啊?
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wurenzhi0721

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
13750061楼: Originally posted by wjswj at 2009-07-14 08:49:09:
曾经傻乎乎的用TE缓冲液溶蛋白去挂镍柱,结果……后来想想真好笑:)

有才
你快乐所以我快乐,我快乐所以大家也快乐
21楼2012-05-03 19:44:53
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zplipeng

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不懂啊。。。。
等待高人回答
加油哦↖(^ω^)↗,O(∩_∩)O哈哈~
2楼2009-07-12 09:47:04
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txstbbm

铁虫 (小有名气)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-12 10:51
可能情况:
1,ORF不完整或者不是预期的ORF,His没表达出来
2,His被空间结构所掩盖,建议变性后再过柱
3楼2009-07-12 09:49:01
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cloudy3197

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-12 11:27
同一ls,可能跟蛋白空间结构有关,变性后再上柱。

另外,是否是柱子本身的问题,也可以重新脱镍挂镍后再看看~~
4楼2009-07-12 11:18:22
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