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[求助]
点突变求助，求问关于大肠杆菌对线性质粒的修复过程 已有1人参与
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各位大佬请问一下我把环P后的突变质粒用DpnI消化后胶回收纯化，然后直接转化到大肠杆菌中，但是测序的时候发现在P出的两个末端之间插入了整数个引物的序列，一般在十个左右，按理说应该已经除掉引物和模板碎片了，不知道为什么还会有这种情况。 PCR的引物一开始用的是反向互补的，插入现象很严重，几乎所有阳性克隆都有插入片段；后来改用不完全互补的引物之后，稍微好了点但是也有个别的出现了插入，这样看应该也不是PCR引入的啊。 另外想请问一下大肠杆菌的连接酶的工作原理，是连接任意平末端么。 谢谢大佬们  。 |
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