24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1637  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

f1789954073y

新虫 (小有名气)

[交流] 用NEB HiFi DNA组装试剂盒连接4个片段,转化DH5α大肠杆菌后,没有菌落长出 已有2人参与

组装四个片段大小分别为560,720,1600,220bp,与4500空载连接,转化大肠杆菌后没有菌落长出。overlap sequence长25bp,snapgene软件测试可以组装。求助各位网友

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzfcsdr

捐助贵宾 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by f1789954073y at 2020-05-15 12:13:05
NEB HiFI DNA组装试剂盒就是利用同源重组的方法。没有菌落长出来,没菌可挑呀
...

最好分两次做吧!无缝克隆可以试试碧云天的,便宜又好用。

发自小木虫Android客户端
4楼2020-07-05 01:07:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

only314

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
四个片段有点多,常规的酶切酶连的方法成功率可能不太高,可以尝试一下同源重组的方法。感受态细胞的效率也需要保证,这样能够多挑几个菌落哈~
2楼2020-05-15 10:29:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

f1789954073y

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by only314 at 2020-05-15 10:29:22
四个片段有点多,常规的酶切酶连的方法成功率可能不太高,可以尝试一下同源重组的方法。感受态细胞的效率也需要保证,这样能够多挑几个菌落哈~

NEB HiFI DNA组装试剂盒就是利用同源重组的方法。没有菌落长出来,没菌可挑呀

发自小木虫Android客户端
3楼2020-05-15 12:13:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 277跪求调剂 +8 1915668 2026-03-27 12/600 2026-03-30 21:01 by dophin1985
[考研] 297求调剂 +3 田洪有 2026-03-30 3/150 2026-03-30 20:43 by wxiongid
[考研] 304材料求调剂 +5 钟llll 2026-03-26 5/250 2026-03-30 19:37 by 源_2020
[考研] 311求调剂 +7 蓝月亮亮 2026-03-30 7/350 2026-03-30 19:24 by 无际的草原
[考研] 材料专硕调剂 +11 椰椰。 2026-03-29 11/550 2026-03-30 16:21 by wangjy2002
[考研] 环境科学与工程334分求调剂 +6 王一一依依 2026-03-30 8/400 2026-03-30 11:52 by yjolah
[考研] 317求调剂 +10 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 10/500 2026-03-30 09:45 by longlotian
[考研] 329求调剂 +10 钮恩雪 2026-03-25 10/500 2026-03-29 13:32 by peike
[考研] 349求调剂 +6 李木子啊哈哈 2026-03-25 6/300 2026-03-29 12:47 by 无际的草原
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +4 IceGuo 2026-03-26 5/250 2026-03-29 01:25 by griffith2014
[考研] 343求调剂 +5 爱羁绊 2026-03-28 5/250 2026-03-28 20:53 by 唐沐儿
[考研] 一志愿华理,数一英一285求A区调剂 +8 AZMK 2026-03-25 12/600 2026-03-28 18:15 by AZMK
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-03-27 7/350 2026-03-27 20:59 by AZMK
[考研] 265求调剂11408 +3 刘小鹿lu 2026-03-27 3/150 2026-03-27 20:53 by nihaoar
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
[考研] 调剂 +4 柚柚yoyo 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:43 by fmesaito
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
信息提示
请填处理意见