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f1789954073y

新虫 (小有名气)

[交流] 用NEB HiFi DNA组装试剂盒连接4个片段，转化DH5α大肠杆菌后，没有菌落长出 已有2人参与

组装四个片段大小分别为560，720，1600，220bp，与4500空载连接，转化大肠杆菌后没有菌落长出。overlap sequence长25bp，snapgene软件测试可以组装。求助各位网友

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1楼 2020-05-14 22:58:51
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only314

新虫 (初入文坛)
★
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四个片段有点多,常规的酶切酶连的方法成功率可能不太高，可以尝试一下同源重组的方法。感受态细胞的效率也需要保证，这样能够多挑几个菌落哈~
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2楼2020-05-15 10:29:22
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f1789954073y

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by only314 at 2020-05-15 10:29:22
四个片段有点多,常规的酶切酶连的方法成功率可能不太高，可以尝试一下同源重组的方法。感受态细胞的效率也需要保证，这样能够多挑几个菌落哈~

NEB HiFI DNA组装试剂盒就是利用同源重组的方法。没有菌落长出来，没菌可挑呀

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3楼2020-05-15 12:13:05
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yzfcsdr

捐助贵宾 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by f1789954073y at 2020-05-15 12:13:05
NEB HiFI DNA组装试剂盒就是利用同源重组的方法。没有菌落长出来，没菌可挑呀
...

最好分两次做吧！无缝克隆可以试试碧云天的，便宜又好用。

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4楼2020-07-05 01:07:10
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