应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 用NEB HiFi DNA组装试剂盒连接4个片段，转化DH5α大肠杆菌后，没有菌落长出
41/1返回列表
查看: 1868  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

f1789954073y

新虫 (小有名气)

[交流] 用NEB HiFi DNA组装试剂盒连接4个片段，转化DH5α大肠杆菌后，没有菌落长出 已有2人参与

组装四个片段大小分别为560，720，1600，220bp，与4500空载连接，转化大肠杆菌后没有菌落长出。overlap sequence长25bp，snapgene软件测试可以组装。求助各位网友

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2020-05-14 22:58:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

only314

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
四个片段有点多,常规的酶切酶连的方法成功率可能不太高，可以尝试一下同源重组的方法。感受态细胞的效率也需要保证，这样能够多挑几个菌落哈~
赞一下 回复此楼
2楼2020-05-15 10:29:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

f1789954073y

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by only314 at 2020-05-15 10:29:22
四个片段有点多,常规的酶切酶连的方法成功率可能不太高，可以尝试一下同源重组的方法。感受态细胞的效率也需要保证，这样能够多挑几个菌落哈~

NEB HiFI DNA组装试剂盒就是利用同源重组的方法。没有菌落长出来，没菌可挑呀

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2020-05-15 12:13:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzfcsdr

捐助贵宾 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by f1789954073y at 2020-05-15 12:13:05
NEB HiFI DNA组装试剂盒就是利用同源重组的方法。没有菌落长出来，没菌可挑呀
...

最好分两次做吧！无缝克隆可以试试碧云天的，便宜又好用。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2020-07-05 01:07:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 f1789954073y 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +5 瞬息宇宙 2026-09-01 11/550 2026-09-02 14:15 by simwe390
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭