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夜雨声烦_

新虫 (初入文坛)

[求助] 淀粉消化实验 已有1人参与

想请教一下大家,用猪胰酶做淀粉的消化实验之前,猪胰酶需要先脱盐处理吗?不脱盐处理的话对实验结果有影响吗?谢谢

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南纬27度

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不用,但是有一个前处理的步骤(一般文献里不会写),如下:
1)Dilute 3.15 mL amyloglucosidase with 3.6 mL deionized water. (Diluted amyloglucosidase, 140 unit/mL);
2)Weigh 3.0 g pancreatin into each of four centrifuge tubes and suspend each portion in 20 mL deionized water;
3)Stir for 10 min;
4)Centrifuge for 10 min at 1,500 × g (~4000 rpm)
5)Take 13.5 mL supernatant from each tube (54 mL total) and mix with 6 mL diluted amyloglucosidase and 4 mL invertase (3000 EU/mL,这个酶不加也可以).
一般淀粉消化,需要这两种酶, amyloglucosidase(淀粉转葡萄糖苷酶)和pancreatin(也就是Sigma卖的猪胰酶)。

其次,你想想,猪胰酶是怎么生产出来的?
取出猪的胰腺,然后一系列地处理,得到最终的猪胰酶;
猪胰酶,其实就是一大块胰腺啊,是一个混合酶体系,而且有一部分是不溶于水的;
所以前处理,需要用水把里面具有活性的酶给提取出来再使用;
目的也是为了模拟人体的胰腺吧,才把猪的胰腺整块取出加工;
也没办法,目前是国际通用方法。
好久不见...
2楼2020-05-14 03:26:54
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夜雨声烦_

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 南纬27度 at 2020-05-14 03:26:54
不用,但是有一个前处理的步骤(一般文献里不会写),如下:
1)Dilute 3.15 mL amyloglucosidase with 3.6 mL deionized water. (Diluted amyloglucosidase, 140 unit/mL);
2)Weigh 3.0 g pancreatin into each ...

好的,谢谢。所以如果不进行这一步前处理的话,会对实验结果有影响吗?是不是酶的活性会受到抑制呢

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3楼2020-05-14 10:06:44
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南纬27度

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 夜雨声烦_ at 2020-05-14 10:06:44
好的,谢谢。所以如果不进行这一步前处理的话,会对实验结果有影响吗?是不是酶的活性会受到抑制呢
...

应该会有影响吧,毕竟是个混合物,主要是单位质量酶活上的差异;
就像上述列出的预处理细节中,如经过稀释后,Diluted amyloglucosidase, 140 unit/mL
如果你不是这样处理,酶活就不一定是这个数值了。
好久不见...
4楼2020-05-15 01:04:43
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