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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 很简单的实验就是做不出来
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wenmingfu

木虫 (著名写手)

[交流] 很简单的实验就是做不出来

我在提取小桐子总DNA时候，出来的全是RNA，而且28s和18s超好，比我们实验室其他人用试剂盒提的RNA还好，但是我要的DNA一点都没有，郁闷死了，求各位指点指点。
我的方法是1)取约1g左右幼叶，在研钵中加液氮迅速研磨成粉末，转入10mll离心管中，加65度预热4.5ml提取液，摇匀。
2）水浴60min.每个20min摇一次。
3）加等体积氯仿:异戊醇（24:1）抽提液,摇匀至乳浊液。离心10min, 10000rpm,16℃
4)吸取上清，转入新的10ml离心管，按步骤3重复抽提一次；
5)吸取上清，转入新的10ml离心管，加入2倍体积的冰冻无水乙醇，慢慢摇匀，放在-20度冰箱30min
6)挑出沉淀，用75%酒精洗2次，每次10min.
7)无水乙醇洗一次，10min,
8)200ulTE溶解，检测
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1楼 2009-07-06 18:49:25
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
水浴45min，室温离心试试
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2楼2009-07-06 20:34:03
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zplipeng

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
怎么会这样呢？
是不是LZ操作不够温柔，把DNA都搞断了
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加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
3楼2009-07-06 21:25:33
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nancy20052008

木虫 (正式写手)
不要着急，慢慢来
会做好的
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4楼2009-07-06 21:36:29
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
第6步 不要挑出沉淀，直接进行下面步骤
最后一步   加入RNAase，去除RNA
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5楼2009-07-06 22:05:23
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wenmingfu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zplipeng at 2009-7-6 21:25:
怎么会这样呢？
是不是LZ操作不够温柔，把DNA都搞断了

不是，加RNase后什么都没有了
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6楼2009-07-06 22:18:40
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wenmingfu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zplipeng at 2009-7-6 21:25:
怎么会这样呢？
是不是LZ操作不够温柔，把DNA都搞断了

但是我加RNase后什么都没有了
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7楼2009-07-06 22:22:57
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
3）加等体积氯仿:异戊醇（24:1）抽提液,摇匀至乳浊液。离心10min, 10000rpm,16℃

LZ，记得取这个离心后的的下层去做电泳哇，
DNA都跟随细胞碎片沉下去了。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
8楼2009-07-07 02:26:30
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我的方法是1)取约1g左右幼叶，在研钵中加液氮迅速研磨成粉末，转入10mll离心管中，加65度预热4.5ml提取液，摇匀。
2）水浴60min.每个20min摇一次。


水浴时加50uL 1 或 2 M 的NaOH 、Tris-Base母液，或者酚，
再试试看。

[ Last edited by HarveyWang on 2009-7-7 at 02:54 ]
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
9楼2009-07-07 02:41:47
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beisimai895

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
在沉淀的时候加NANC可以有效的进行DNA的沉淀。你可以去查一下这方面的资料。
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10楼2009-07-07 08:30:07
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