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yimifffffff

新虫 (初入文坛)

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我现在在做人工合成基因，找的上海生工公司，公司用于基因合成的标准载体是pUC系列和pBlueScript系列，但是我的参考文献用的是pet-26b（+）载体，请问有做过人工合成的嘛？这两个载体有啥区别？或者大家有什么经验可以传授一下嘛，第一次做不太懂

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1楼 2020-04-01 19:07:00

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原海亮

木虫 (著名写手)

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大家会根据不同的用途，选择不同类型的载体，关于puc系列和pet系列的区别，个人觉得主要体现在多克隆位点上游的启动子类型，puc应该用到是lac启动子，pet使用的是T7启动子。
   众所周知，T7启动子是在原核表达特别是大肠杆菌表达体系中，非常强效的启动子，常用于目的蛋白的高量表达，在对应的表达宿主中（BL21等）经诱导后，可以将菌体的资源大部分用于目的蛋白表达，从而达到实验目的，这也是诱导后菌体生长繁殖速度降低的一个原因。
而puc系列载体是一个通用的克隆载体，通俗的讲，相对T7启动子，它更侧重于菌体的正常繁殖速度，这样就有一个好处，可以通过菌体的正常生长，来实现目标载体拷贝数的富集，当我们需要提取质粒，或者相应的基因时，这个载体是比较好的选择。
商业化的基因合成，没有客户特别要求的时候，都是默认将目标基因整合至puc系列、pblue或者其他T载体上，然后克隆至DH5α、top10等克隆宿主中，让客户可以通过该载体大量的获得目的基因。这个载体就相当于我们基因的一个储备种子，需要的时候可以通过它来大量的增殖相应的基因。
   当然，实际的科研中，商业公司提供的这些载体一般不是我实验所需的，那就需要经过亚克隆，将目标基因克隆至我们需要的载体上或者宿主里面，来进行相应的研究。像学校的实验室，老师通常会建议学生将质粒分别放在克隆宿主和表达宿主内。克隆宿主是为后续研究提供原料，表达宿主可以直接用于表达，防止时间长了，表达宿主内质粒丢失。
   其实，目前很多基因合成公司已经可以提供常见载体和宿主了，像你这样的情况，pet系列载体非常常见，很多公司都可以直接给你克隆至pet载体的，而且还可以帮你克隆至常见的表达宿主内。另外你看的文献可能时间较久了，现在pet系列载体已经更新到pet32了，可以对比一下最近的载体，选择更合适的。祝好。