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yimifffffff

新虫 (初入文坛)


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人工合成基因
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我现在在做人工合成基因,找的上海生工公司,公司用于基因合成的标准载体是pUC系列和pBlueScript系列,但是我的参考文献用的是pet-26b(+)载体,请问有做过人工合成的嘛?这两个载体有啥区别?或者大家有什么经验可以传授一下嘛,第一次做不太懂

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原海亮

木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
大家会根据不同的用途,选择不同类型的载体,关于puc系列和pet系列的区别,个人觉得主要体现在多克隆位点上游的启动子类型,puc应该用到是lac启动子,pet使用的是T7启动子。
     众所周知,T7启动子是在原核表达特别是大肠杆菌表达体系中,非常强效的启动子,常用于目的蛋白的高量表达,在对应的表达宿主中(BL21等)经诱导后,可以将菌体的资源大部分用于目的蛋白表达,从而达到实验目的,这也是诱导后菌体生长繁殖速度降低的一个原因。
    而puc系列载体是一个通用的克隆载体,通俗的讲,相对T7启动子,它更侧重于菌体的正常繁殖速度,这样就有一个好处,可以通过菌体的正常生长,来实现目标载体拷贝数的富集,当我们需要提取质粒,或者相应的基因时,这个载体是比较好的选择。
    商业化的基因合成,没有客户特别要求的时候,都是默认将目标基因整合至puc系列、pblue或者其他T载体上,然后克隆至DH5α、top10等克隆宿主中,让客户可以通过该载体大量 的获得目的基因。这个载体就相当于我们基因的一个储备种子,需要的时候可以通过它来大量的增殖相应的基因。
     当然,实际的科研中,商业公司提供的这些载体一般不是我实验所需的,那就需要经过亚克隆,将目标基因克隆至我们需要的载体上或者宿主里面,来进行相应的研究。像学校的实验室,老师通常会建议学生将质粒分别放在克隆宿主和表达宿主内。克隆宿主是为后续研究提供原料,表达宿主可以直接用于表达,防止时间长了,表达宿主内质粒丢失。
     其实,目前很多基因合成公司已经可以提供常见载体和宿主了,像你这样的情况,pet系列载体非常常见,很多公司都可以直接给你克隆至pet载体的,而且还可以帮你克隆至常见的表达宿主内。另外你看的文献可能时间较久了,现在pet系列载体已经更新到pet32了,可以对比一下最近的载体,选择更合适的。祝好。

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14楼2020-04-09 11:36:59
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weebug

版主 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
要下载这两种的说明书,看有什么区别
8楼2020-04-01 20:54:47
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yimifffffff

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
8楼: Originally posted by weebug at 2020-04-01 20:54:47
要下载这两种的说明书,看有什么区别

请问您做过基因合成嘛?有问题想请教一下

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9楼2020-04-01 21:30:04
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weebug

版主 (著名写手)


引用回帖:
9楼: Originally posted by yimifffffff at 2020-04-01 21:30:04
请问您做过基因合成嘛?有问题想请教一下
...

做过基因表达
10楼2020-04-01 21:47:22
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xtcao668

至尊木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
克隆载体和表达载体的区别,文献里的表达载体……

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11楼2020-04-01 23:09:17
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yimifffffff

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
11楼: Originally posted by xtcao668 at 2020-04-01 23:09:17
克隆载体和表达载体的区别,文献里的表达载体……

谢谢您的回答,那克隆载体和表达载体是都要用嘛?

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12楼2020-04-01 23:36:36
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


13楼2020-04-02 10:15:56
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yimifffffff

新虫 (初入文坛)


送红花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by 原海亮 at 2020-04-09 11:36:59
大家会根据不同的用途,选择不同类型的载体,关于puc系列和pet系列的区别,个人觉得主要体现在多克隆位点上游的启动子类型,puc应该用到是lac启动子,pet使用的是T7启动子。
     众所周知,T7启动子是在原核表达特 ...

抱歉现在才看到,非常感谢您的回复!我再根据您说的查些资料,希望以后有问题也可以向您请教。

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15楼2020-05-07 12:54:27
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213ti2楼
2020-04-01 19:07   回复  
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2020-04-01 19:07   回复  
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Tscallion4楼
2020-04-01 19:12   回复  
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linzhuo6楼
2020-04-01 19:15   回复  
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2020-04-01 19:15   回复  
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