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smallcat227

木虫 (著名写手)

[交流] 求助:GFP标记枯草芽孢杆菌

如题,穿梭载体是pUBC19,启动子是从标记菌株中筛选的,抗生素筛选用卡纳,每次构建的穿梭载体在大肠中都能良好表达,转入枯草后表达量就很低,蒙蒙亮(确定质粒已转入),无法满足进一步实验的需要(检测定殖),电转化转都不行,请教各位大侠失败的原因,是启动子不够强么(实验中用不同的启动子构建了多个穿梭载体都不行,每次大肠都很亮但转到枯草中就是不行),还是枯草的蛋白酶将GFP水解了?各位有什么建议?非常感谢!
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hu6704526

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-3 21:29
smallcat227(金币+2,VIP+0): 8-26 10:53
我觉得是密码子的偏爱性的原因,两个菌株(大肠杆菌和枯草)具体的GC含量不一样就会导致表达的情况不一样,应该从你的GFP序列是否适合在枯草中表达。说不定不是启动子的问题呢。
3楼2009-07-03 21:18:33
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zplipeng

金虫 (著名写手)

Lz多查查文献看看,,,
加油哦↖(^ω^)↗,O(∩_∩)O哈哈~
2楼2009-07-03 20:14:30
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smallcat227

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by hu6704526 at 2009-7-3 21:18:
我觉得是密码子的偏爱性的原因,两个菌株(大肠杆菌和枯草)具体的GC含量不一样就会导致表达的情况不一样,应该从你的GFP序列是否适合在枯草中表达。说不定不是启动子的问题呢。

GFP在枯草中表达是没问题的,这个很多人都做过的,当然阳性菌的转化和表达是要比阴性菌困难很多,不过也不至于这样吧
4楼2009-07-03 23:49:19
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smallcat227

木虫 (著名写手)

现在转化枯草芽孢168也可以很亮,但野生型还是不行,这就是野生和驯养的区别么…………
5楼2009-08-24 20:41:44
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