24小时热门版块排行榜    

查看: 831  |  回复: 6
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)

[交流] 求助:GFP标记枯草芽孢杆菌

如题,穿梭载体是pUBC19,启动子是从标记菌株中筛选的,抗生素筛选用卡纳,每次构建的穿梭载体在大肠中都能良好表达,转入枯草后表达量就很低,蒙蒙亮(确定质粒已转入),无法满足进一步实验的需要(检测定殖),电转化转都不行,请教各位大侠失败的原因,是启动子不够强么(实验中用不同的启动子构建了多个穿梭载体都不行,每次大肠都很亮但转到枯草中就是不行),还是枯草的蛋白酶将GFP水解了?各位有什么建议?非常感谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hu6704526

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-3 21:29
smallcat227(金币+2,VIP+0): 8-26 10:53
我觉得是密码子的偏爱性的原因,两个菌株(大肠杆菌和枯草)具体的GC含量不一样就会导致表达的情况不一样,应该从你的GFP序列是否适合在枯草中表达。说不定不是启动子的问题呢。
3楼2009-07-03 21:18:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

zplipeng

金虫 (著名写手)

Lz多查查文献看看,,,
加油哦↖(^ω^)↗,O(∩_∩)O哈哈~
2楼2009-07-03 20:14:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by hu6704526 at 2009-7-3 21:18:
我觉得是密码子的偏爱性的原因,两个菌株(大肠杆菌和枯草)具体的GC含量不一样就会导致表达的情况不一样,应该从你的GFP序列是否适合在枯草中表达。说不定不是启动子的问题呢。

GFP在枯草中表达是没问题的,这个很多人都做过的,当然阳性菌的转化和表达是要比阴性菌困难很多,不过也不至于这样吧
4楼2009-07-03 23:49:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)

现在转化枯草芽孢168也可以很亮,但野生型还是不行,这就是野生和驯养的区别么…………
5楼2009-08-24 20:41:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工考研调剂 +7 孅華 2026-03-22 7/350 2026-03-24 21:04 by greychen00
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:17 by pswait
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 300求调剂,材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 277分求调剂,跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工328分调剂 +4 。,。,。,。i 2026-03-23 4/200 2026-03-24 11:03 by 544594351
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 材料/农业专业,07/08开头均可,过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪!?!
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +5 niko- 2026-03-22 5/250 2026-03-23 22:01 by fuyu_
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪!?!
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 考研调剂 +4 来好运来来来 2026-03-21 4/200 2026-03-22 12:15 by 星空星月
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 22 350 本科985求调剂,求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
信息提示
请填处理意见