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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：GFP标记枯草芽孢杆菌
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smallcat227

木虫 (著名写手)

[交流] 求助：GFP标记枯草芽孢杆菌

如题，穿梭载体是pUBC19，启动子是从标记菌株中筛选的，抗生素筛选用卡纳，每次构建的穿梭载体在大肠中都能良好表达，转入枯草后表达量就很低，蒙蒙亮（确定质粒已转入），无法满足进一步实验的需要（检测定殖），电转化转都不行，请教各位大侠失败的原因，是启动子不够强么（实验中用不同的启动子构建了多个穿梭载体都不行，每次大肠都很亮但转到枯草中就是不行），还是枯草的蛋白酶将GFP水解了？各位有什么建议？非常感谢！
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1楼 2009-07-03 11:25:13
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zplipeng

金虫 (著名写手)
Lz多查查文献看看，，，
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加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
2楼2009-07-03 20:14:30
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hu6704526

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-3 21:29
smallcat227(金币+2,VIP+0): 8-26 10:53
我觉得是密码子的偏爱性的原因，两个菌株（大肠杆菌和枯草）具体的GC含量不一样就会导致表达的情况不一样，应该从你的GFP序列是否适合在枯草中表达。说不定不是启动子的问题呢。
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3楼2009-07-03 21:18:33
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smallcat227

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by hu6704526 at 2009-7-3 21:18:
我觉得是密码子的偏爱性的原因，两个菌株（大肠杆菌和枯草）具体的GC含量不一样就会导致表达的情况不一样，应该从你的GFP序列是否适合在枯草中表达。说不定不是启动子的问题呢。

GFP在枯草中表达是没问题的，这个很多人都做过的，当然阳性菌的转化和表达是要比阴性菌困难很多，不过也不至于这样吧
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4楼2009-07-03 23:49:19
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smallcat227

木虫 (著名写手)
现在转化枯草芽孢168也可以很亮，但野生型还是不行，这就是野生和驯养的区别么…………
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5楼2009-08-24 20:41:44
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rural2084

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
smallcat227(金币+2,VIP+0): 8-26 10:53
还有一个问题就是，你所选用的野生型菌株可能不是枯草芽孢杆菌，因为枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌非常容易混淆。因此，建议用鉴定确切的野生型枯草芽孢杆菌，或者多选几株进行试验。
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6楼2009-08-25 11:22:10
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smallcat227

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by rural2084 at 2009-8-25 11:22:
还有一个问题就是，你所选用的野生型菌株可能不是枯草芽孢杆菌，因为枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌非常容易混淆。因此，建议用鉴定确切的野生型枯草芽孢杆菌，或者多选几株进行试验。

多谢！
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7楼2009-08-26 10:52:32
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