24小时热门版块排行榜    

查看: 827  |  回复: 6
当前主题已经存档。

smallcat227

木虫 (著名写手)

[交流] 求助:GFP标记枯草芽孢杆菌

如题,穿梭载体是pUBC19,启动子是从标记菌株中筛选的,抗生素筛选用卡纳,每次构建的穿梭载体在大肠中都能良好表达,转入枯草后表达量就很低,蒙蒙亮(确定质粒已转入),无法满足进一步实验的需要(检测定殖),电转化转都不行,请教各位大侠失败的原因,是启动子不够强么(实验中用不同的启动子构建了多个穿梭载体都不行,每次大肠都很亮但转到枯草中就是不行),还是枯草的蛋白酶将GFP水解了?各位有什么建议?非常感谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zplipeng

金虫 (著名写手)

Lz多查查文献看看,,,
加油哦↖(^ω^)↗,O(∩_∩)O哈哈~
2楼2009-07-03 20:14:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hu6704526

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-3 21:29
smallcat227(金币+2,VIP+0): 8-26 10:53
我觉得是密码子的偏爱性的原因,两个菌株(大肠杆菌和枯草)具体的GC含量不一样就会导致表达的情况不一样,应该从你的GFP序列是否适合在枯草中表达。说不定不是启动子的问题呢。
3楼2009-07-03 21:18:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by hu6704526 at 2009-7-3 21:18:
我觉得是密码子的偏爱性的原因,两个菌株(大肠杆菌和枯草)具体的GC含量不一样就会导致表达的情况不一样,应该从你的GFP序列是否适合在枯草中表达。说不定不是启动子的问题呢。

GFP在枯草中表达是没问题的,这个很多人都做过的,当然阳性菌的转化和表达是要比阴性菌困难很多,不过也不至于这样吧
4楼2009-07-03 23:49:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)

现在转化枯草芽孢168也可以很亮,但野生型还是不行,这就是野生和驯养的区别么…………
5楼2009-08-24 20:41:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rural2084

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
smallcat227(金币+2,VIP+0): 8-26 10:53
还有一个问题就是,你所选用的野生型菌株可能不是枯草芽孢杆菌,因为枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌非常容易混淆。因此,建议用鉴定确切的野生型枯草芽孢杆菌,或者多选几株进行试验。
6楼2009-08-25 11:22:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by rural2084 at 2009-8-25 11:22:
还有一个问题就是,你所选用的野生型菌株可能不是枯草芽孢杆菌,因为枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌非常容易混淆。因此,建议用鉴定确切的野生型枯草芽孢杆菌,或者多选几株进行试验。

多谢!
7楼2009-08-26 10:52:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 smallcat227 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工调剂 +7 A-哆啦Z梦 2026-03-23 12/600 2026-03-23 23:16 by 星空星月
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 一志愿中国石油大学(华东) 本科齐鲁工业大学 +4 石能伟 2026-03-17 4/200 2026-03-23 17:51 by 17862566385
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 352求调剂 +3 大米饭! 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123!
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 297求调剂 +11 戏精丹丹丹 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:47 by ColorlessPI
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
信息提示
请填处理意见