24小时热门版块排行榜    

查看: 828  |  回复: 6
当前主题已经存档。

smallcat227

木虫 (著名写手)

[交流] 求助:GFP标记枯草芽孢杆菌

如题,穿梭载体是pUBC19,启动子是从标记菌株中筛选的,抗生素筛选用卡纳,每次构建的穿梭载体在大肠中都能良好表达,转入枯草后表达量就很低,蒙蒙亮(确定质粒已转入),无法满足进一步实验的需要(检测定殖),电转化转都不行,请教各位大侠失败的原因,是启动子不够强么(实验中用不同的启动子构建了多个穿梭载体都不行,每次大肠都很亮但转到枯草中就是不行),还是枯草的蛋白酶将GFP水解了?各位有什么建议?非常感谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zplipeng

金虫 (著名写手)

Lz多查查文献看看,,,
加油哦↖(^ω^)↗,O(∩_∩)O哈哈~
2楼2009-07-03 20:14:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hu6704526

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-3 21:29
smallcat227(金币+2,VIP+0): 8-26 10:53
我觉得是密码子的偏爱性的原因,两个菌株(大肠杆菌和枯草)具体的GC含量不一样就会导致表达的情况不一样,应该从你的GFP序列是否适合在枯草中表达。说不定不是启动子的问题呢。
3楼2009-07-03 21:18:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by hu6704526 at 2009-7-3 21:18:
我觉得是密码子的偏爱性的原因,两个菌株(大肠杆菌和枯草)具体的GC含量不一样就会导致表达的情况不一样,应该从你的GFP序列是否适合在枯草中表达。说不定不是启动子的问题呢。

GFP在枯草中表达是没问题的,这个很多人都做过的,当然阳性菌的转化和表达是要比阴性菌困难很多,不过也不至于这样吧
4楼2009-07-03 23:49:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)

现在转化枯草芽孢168也可以很亮,但野生型还是不行,这就是野生和驯养的区别么…………
5楼2009-08-24 20:41:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rural2084

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
smallcat227(金币+2,VIP+0): 8-26 10:53
还有一个问题就是,你所选用的野生型菌株可能不是枯草芽孢杆菌,因为枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌非常容易混淆。因此,建议用鉴定确切的野生型枯草芽孢杆菌,或者多选几株进行试验。
6楼2009-08-25 11:22:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by rural2084 at 2009-8-25 11:22:
还有一个问题就是,你所选用的野生型菌株可能不是枯草芽孢杆菌,因为枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌非常容易混淆。因此,建议用鉴定确切的野生型枯草芽孢杆菌,或者多选几株进行试验。

多谢!
7楼2009-08-26 10:52:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 smallcat227 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 招08考数学 +6 laoshidan 2026-03-20 15/750 2026-03-24 16:22 by laoshidan
[考研] 081700 调剂 267分 +9 迷人的哈哈 2026-03-23 9/450 2026-03-24 11:58 by 544594351
[考研] 求材料,环境专业调剂 +3 18567500178 2026-03-18 3/150 2026-03-23 23:50 by 热情沙漠
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[考研] 一志愿070300浙大化学358分,求调剂! +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 一志愿中南化学(0703)总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考! +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
信息提示
请填处理意见